产品介绍

       14-3-3蛋白是一个在所有真核细胞中表达的保守衔接蛋白和支架蛋白家族。它们由YWHA基因家族编码。14-3-3蛋白的一个显著特征是它们结合细胞蛋白的能力，包括激酶、磷酸酶和跨膜受体。14-3-3蛋白作为二聚体发挥作用，其中每个单体能够结合靶标。14-3-3蛋白的主要功能是以类似于Src同源性2的方式以序列特异性方式结合含磷酸丝氨酸/苏氨酸的基序，例如RSxpSxP，模式-1和RxxxpSxP，类型-2（其中pS表示磷酸丝氨酸），以及结合含磷酸酪氨酸基序的磷酸酪氨酸结合结构域。这使得14-3-3在广泛的重要调节过程中发挥重要作用，如神经元发育、有丝分裂信号转导、凋亡细胞死亡、细胞周期控制、细胞生长控制以及病毒和细菌的发病机制。14-3-3在大脑中含量丰富，但也存在于几乎所有组织中，包括睾丸、肝脏和心脏。在真核细胞中，14-3-3主要存在于细胞质区室中。然而，14-3-3蛋白也可以在质膜和细胞内细胞器（如细胞核和高尔基体）中检测到。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容 

品    名：	14-3-3 INDUCED INTRACELLULAR SIGNALING PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0164-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

AKT1

ERBB2

IL6

MAP2K3

MAPK12

MRAS

PLCB1

PRKCD

RPS6KA5

TNF

TUBA8

YWHAG

B

AKT1S1

FOS

INSR

MAP2K4

MAPK14

NRAS

PLCB2

PRKCE

RPS6KB1

TNFRSF1A

TUBB1

YWHAH

C

BAD

GRB2

JUN

MAP2K5

MAPK3

PIK3C2A

PLCD1

PRKCQ

RPS6KB2

TP73

TUBB2A

PRKCB

D

CBL

GSK3B

KDR

MAP2K6

MAPK6

PIK3CA

PLCE1

PRKCZ

RRAS

TRAF2

TUBG1

RPS6KA3

E

CD55

HRAS

KIT

MAP3K5

MAPK7

PIK3CB

PLCG1

RAF1

RRAS2

TSC1

VIM

TGFB1

F

CXCL12

IGF1

KRAS

MAPK1

MAPK8

PIK3CD

PLCG2

RPS6KA1

SNCA

TSC2

YAP1

TUBA4A

G

EGFR

IGF1R

MAP2K1

MAPK10

MAPK9

PIK3R1

PRKCA

RPS6KA2

SRC

TUBA3C

YWHAB

YWHAE

H

ELK1

IL2

MAP2K2

MAPK11

MAPT

PIK3R2

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.