产品介绍：

      AMP活化蛋白激酶（AMPK），由三种蛋白质亚基（α，β，γ）组成的，在细胞能量稳态中发挥作用且在真核细胞中高度保守。当细胞内ATP被消耗殆尽（如低血糖、缺氧、缺血及热休克），AMPK通过 LKB1 (STK11) 或钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶 (CAMKK) 进行磷酸化和激活，来应对细胞内低水平的ATP。AMPK被磷酸化激活后会抑制ATP消耗过程（如糖异生、脂质合成和蛋白质合成）并激活产生ATP的分解代谢途径（如糖酵解、脂肪酸氧化、自噬）。 AMPK 激活后通过直接参与这些过程的多种酶的磷酸化以及通过磷酸化转录因子、共激活因子和共阻遏物对代谢的转录控制起作用。由于AMPK信号通路在葡萄糖代谢和脂质代谢中的作用，认为是肥胖症、2 型糖尿病、代谢综合征和癌症新疗法开发的潜在靶点。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品名：	AMPK Signaling pathway PCR Array
种属：	Rat
货号：	wc-mRNA0009-R
规格：	96孔板
品牌：	WCGENE ® biotech
产品：	96孔引物预制板，封板膜，说明书
储存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Acaca

Acacb

Adipor1

Adipor2

Adra1a

Adra1b

Adra1d

Adra2a

Adra2b

Adra2c

Ak1

Ak2

B

Ak3

Akt1

Akt2

Akt3

Atg13

Cab39

Camkk1

Camkk2

Ccna1

Ccna2

Ccnb1

Chrna1

C

Chrnb1

Cpt1a

Cpt1b

Cpt1c

Cpt2

Crtc2

Cry1

Eef2k

Eif4ebp1

Elavl1

Fasn

Foxo3

D

Gpam

Gpat2

Gys1

Gys2

Hdac4

Hdac5

Hmgcr

Hnf4a

Insr

Kras

Lepr

Lipe

E

Mlycd

Mtor

Pdpk1

Pfkfb1

Pfkfb2

Pfkfb3

Pfkfb4

Pnpla2

Ppargc1a

Ppargc1b

Ppp2ca

Ppp2cb

F

Ppp2r1a

Ppp2r1b

Ppp2r2b

Ppp2r4

Prkaa1

Prkaa2

Prkab1

Prkab2

Prkaca

Prkacb

Prkag1

Prkag2

G

Prkag3

Prkar1a

Prkar1b

Prkar2a

Prkar2b

Rb1cc1

Rps6kb1

Rps6kb2

Rptor

Slc2a4

Srebf1

Stk11

H

Strada

Stradb

Tp53

Tsc1

Tsc2

Ulk1

Actb

Gapdh

Hprt1

Ubb

NTC

NTC

基因分类(Rat)	相关基因
AMPK催化/调节亚基	Prkaa1 ,Prkaa2,Prkab1,Prkab2,Prkag1,Prkag2,Prkag3.
cAMP 依赖性蛋白激酶	Prkaca,Prkacb,Prkar1a,Prkar1b,Prkar2a,Prkar2b.
蛋白磷酸化酶	Ppp2ca,Ppp2cb,Ppp2r1a,Ppp2r1b,Ppp2r2b,Ptpa.
自噬	Atg13,Rb1cc1,Ulk1.
脂肪酸代谢	Acaca,Acacb,Cpt1a,Cpt1b,Cpt1c,Cpt2,Fasn,Gpam,Gpat2,Hmgcr,Lipe,Mlycd,Pnpla2.
葡萄糖代谢	Gys1,Gys2,Pfkfb1,Pfkfb2,Pfkfb3,Pfkfb4,Slc2a4 .
mTOR信号	Cab39,Mtor,Rptor,Stk11 ,Strada,Stradb,Tsc1,Tsc2.
蛋白质合成	Eef2k,Eif4ebp1,Rps6kb1,Rps6kb2.
转录调控	Crtc2,Cry1,Elavl1,Foxo3,Hnf4a,Ppargc1a ,Ppargc1b,Srebf1,Tp53 ,Ccna1,Ccna2,Ccnb1,
钙/钙调素信号传导	Camkk1,Camkk2.
AKT 和 PI3 激酶信号转导	Akt1,Akt2,Akt3,Pdpk1,
腺苷酸激酶	Ak1,Ak2,Ak3.
相关受体基因	Adra1a,Adra1b,Adra1d,Adra2a,Adra2b,Adra2c,Adipor1,Adipor2,Insr,Lepr,Chrna1,Chrnb1.

AMPK Signaling 通路图

图片来源于：https://www.wikipathways.org/index.php/Pathway:WP1403#nogo2

参考文献：Martens M, Ammar A, Riutta A, Waagmeester A, Slenter DN, Hanspers K, Miller RA, Digles D, Lopes EN, Ehrhart F, Dupuis LJ, Winckers LA, Coort SL, Willighagen EL, Evelo CT, Pico AR, Kutmon M. WikiPathways: connecting communities Nucleic Acids Research, (2021), Volume 49, Issue D1, 8 January 2021, Pages D613–D621, doi.org/10.1093/nar/gkaa1024 PMID:33211851.

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.