产品介绍：

       细胞-细胞粘附连接（AJ）是最常见的细胞间粘附类型，对维持组织结构和细胞极性非常重要，可限制细胞运动和增殖。在AJs中，E-钙粘蛋白作为一种重要的细胞粘附分子（CAM）。

       粘附连接发生在连接相邻上皮细胞的粘附带或培养成纤维细胞下表面的局部接触处。桥粒是锚定细胞-细胞连接，通常形成于2个上皮细胞之间，以致密蛋白斑块为特征。粘附连接在内部将钙粘蛋白连接到肌动蛋白丝，而桥粒将钙粘素连接到中间丝，如角蛋白和结蛋白丝。除钙粘蛋白外，粘附连接的细胞表面受体成分还包括桥粒蛋白、桥粒粒蛋白、连接蛋白和Notch蛋白。粘附蛋白连接-相关蛋白，尤其是连环蛋白，通过磷酸化级联和直接将细胞骨架成分招募到连接的G蛋白，招募调节细胞骨架的蛋白激酶。粘附连接调节几个关键的正常生物学过程，包括肠吸收、角化、血管生物学和WNT依赖性发育。粘着功能和完整性的失调在疾病的病理生理学中起着关键作用，如心肌病、纤维增生性疾病、多囊肾病和肿瘤转移期间的上皮-间质转化。

       WCGENE®PCRArrayPlate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况

产品内容

品    名：	Adherens Junctions PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0002-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ACTG1

ARVCF

CDH4

CSNK2B

DNM1

DSG3

HGS

NME1

PIK3CG

PVRL1

SSX2IP

WASL

B

ACTN1

BAIAP2

CDH5

CTNNA1

DNM2

DSG4

HPRT1

NOTCH1

PKP1

PVRL2

TJP1

ZYX

C

ACTN2

CBLL1

CDSN

CTNNA2

DOCK4

DSP

IQGAP1

NOTCH2

PKP2

PVRL3

TLN1

MLLT4

D

ACTN3

CDC27

CLDN1

CTNNA3

DSC1

EXOC2

JUP

NOTCH3

PKP3

PVRL4

TLN2

PERP

E

ACTN4

CDC42

CLDN3

CTNNB1

DSC2

F11R

LMO7

NOTCH4

PKP4

RAC1

VCL

PPL

F

AJAP1

CDH1

CLDN5

CTNND1

DSC3

FARP2

MAPRE1

P2RX6

PNN

RALA

VEZT

SORBS1

G

ANAPC1

CDH2

CSNK2A1

DLG5

DSG1

FLNA

MAPRE2

PARD3

PPAP2B

RHOA

WAS

WASF1

H

ARF6

CDH3

CSNK2A2

DLL1

DSG2

FLNB

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Human）	相关基因
钙粘蛋白	CDH1 ,CDH2,CDH3,CDH4,CDH5
桥粒胶蛋白和桥粒芯蛋白	DSC1,DSC2,DSC3,DSG1,DSG2,DSG3,DSG4
连接蛋白	PVRL1,PVRL2,PVRL3,PVRL4
Notch信号	DLL1,NOTCH1,NOTCH2,NOTCH3,NOTCH4
桥粒	CDSN,DSP,JUP,PKP1,PKP2,PKP3,PKP4,PNN,PPL
连接相关蛋白	AFDN,AJAP1,CTNND1,DLG5,P2RX6,PARD3,PERP,TJP1,VEZT
连环素	ARVCF,CTNNA1,CTNNA2,CTNNA3,CTNNB1,CTNND1
细胞骨架调节因子	ACTN1,ACTN2,ACTN3,ACTN4,ANAPC1,BAIAP2,CDC27,EXOC2,FARP2,FLNA,FLNB,LMO7,MAPRE1,MAPRE2,NME1,PARD3,SORBS1,SSX2IP,TLN1,TLN2,VCL,WAS,WASF1,WASL,ZYX
胞吞作用	DNM1,DNM2,HGS,LMO7,PIK3CG,PPAP2B,SORBS1
蛋白激酶信号	CSNK2A1,CSNK2A2,CSNK2B,DLG5
G蛋白信号	AFDN,ARF6,CDC42,DOCK4,FARP2,IQGAP1,RAC1,RALA,RHOA
泛素蛋白连接酶	ANAPC1,CBLL1

粘性连接通路图：

图片来源：https://www.kegg.jp/pathway/map04520

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.