产品介绍：

       脂肪生成是脂肪细胞从前脂肪细胞分化为脂肪细胞（脂肪细胞）的过程。脂肪组织由白色和棕色脂肪组织组成。前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞，通常形成脂肪组织，以响应正能量平衡。脂肪组织不仅储存能量，而且是一个动态的内分泌器官，对激素和细胞因子（脂肪因子）的分泌非常重要。白色脂肪组织（WAT）位于哺乳动物的腹部和皮下沉积物中，执行大部分能量储存和脂肪因子分泌。棕色脂肪组织（BAT）介导非颤抖性产热，众所周知可以保护婴儿免受寒冷暴露。最近的研究还发现，成年人体内有大量BAT沉积，这可能在肥胖和能量平衡中发挥重要作用，导致代谢综合征和糖尿病的潜在治疗选择。这两种脂肪组织的分化和维持是相互关联的，涉及多种信号通路和转录因子，其表达随时间而变化。该序列包括与WAT和BAT脂肪形成有关的主要基因，如激素、脂肪因子、酶、转录因子（尤其是PPARγ和C/EBP家族）和信号转导配体，这些基因对于研究WAT和 BAT之间的复杂相互作用至关重要。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容  

品    名：	Adipogenesis PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0001-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ACACB

BMP1

CDKN1B

DKK1

FGF2

INSR

LEP

NCOR2

PPARGC1B

SHH

TCF7L2

WNT5A

B

ADIG

BMP2

CEBPA

DLK1

FOXC2

IRS1

LIPE

NR0B2

PRDM16

SIRT1

TSC22D3

WNT5B

C

ADIPOQ

BMP3

CEBPB

E2F1

FOXO1

IRS2

LMNA

NR1H3

RB1

SIRT2

TWIST1

NCOA2

D

ADRB2

BMP4

CEBPD

EGR2

GATA2

JUN

LPL

NRF1

RETN

SIRT3

UCP1

PPARGC1A

E

AGPAT2

BMP7

CFD

FABP4

GATA3

KLF15

LRP5

PPARA

RUNX1T1

SLC2A4

VDR

SFRP5

F

AGT

CCND1

CREB1

FASN

GATA4

KLF2

MAPK14

PPARD

RXRA

SRC

WNT1

TAZ

G

ANGPT2

CDK4

DDIT3

FGF1

HES1

KLF3

NAMPT

PPARG

SFRP1

SREBF1

WNT10B

WNT3A

H

AXIN1

CDKN1A

DIO2

FGF10

INS

KLF4

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Human）	相关基因
脂肪生成的调节	脂肪素 ADIG，ADIPOQ，CFD，LEP，RETN.激素AGT，ANGPT2.脂肪酶LIPE，LPL.
PPARγ靶	ADIPOQ，AGT，CEBPA，CFD，FABP4，FASN，IRS2，KLF15，LIPE，LPL，PPARG，PPARGC1A，RETN，SIRT3，SLC2A4，SREBF1
促脂肪生成	ACACB，AXIN1，CCND1，CDK4，CEBPB，CEBPD，DKK1，E2F1，FABP4，FASN，FGF1，FGF2，IRS2，JUN，LMNA，LPL，PPARG，RXRA，SFRP1，SFRP5，SLC2A4，WNT5B
抗脂肪生成	ADRB2，CDKN1A，CDKN1B，DLK1，FOXO1，HES1，LRP5，NCOR2，RUNX1T1，SHH，SIRT1，SIRT2，TAZ，TCF7L2，TSC22D3，VDR，WNT1，WNT3A
亲白色脂肪组织	BMP2，BMP4，CEBPA，EGR2，FGF10，KLF15，KLF4，SREBF1
抗白色脂肪组织	GATA2，GATA3，KLF2，KLF3
亲棕色脂肪组织	BMP7，CREB1，DIO2，FOXC2，INSR，IRS1，MAPK14，NRF1，PPARA，PPARD，PPARGC1A，PPARGC1B，PRDM16，SIRT3，SRC，UCP1，WNT5A
抗棕色脂肪组织	NCOA2，NR0B2，NR1H3，RB1，TWIST1，WNT10B.

        脂肪生成通路图

        图片来源于： https://www.wikipathways.org/index.php/Pathway:WP236#nogo2

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.