产品介绍：

       WCGENE®PCRArrayPlate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Aging PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0003-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Akt1

Angel2

Anxa3

Anxa5

Apoe

Arid1a

Arl6ip6

Bub1b

C1qa

C1qb

C1qc

C1s

B

C3

C3ar1

C4a

C4b

C5ar1

Calb1

Casp1

Ccr1

Cd14

Cd163

Cdkn1c

Cfh

C

Cfhr1

Clu

Col1a1

Ctsd

Ctss

Ctsz

Cx3cl1

Cxcl16

Elavl1

Elp3

Eml1

Ep300

D

Fbxl16

Fcer1g

Fcgbp

Fcgr1a

Fcgr2a

Fcgr2b

Foxo1

Gfap

Hsf1

Hspb1

Jakmip3

Lmna

E

Lmnb1

Lmnb2

Lsm5

Ltf

Lyzl1

Mbp

Mrpl43

Ndufb11

Panx1

Pdcd6

Phf3

Polrmt

F

Pot1

Rap1a

Rnf144b

S100a8

S100a9

Scn2b

Sirt3

Sirt6

Smad2

Snap23

Terf1

Terf2

G

Tfam

Tfb1m

Tfb2m

Tinf2

Tlr2

Tlr4

Tmem135

Tmem33

Tollip

Tpp1

Txnip

Vps13c

H

Vwa5a

Wrn

Zbtb10

Zfp9

Zfr

Zmpste24

Actb

Gapdh

Hprt1

Ubb

NTC

NTC

基因分类（Rat）	相关基因
基因组不稳定性	Bub1b , Mrpl43 , Polrmt , Tfam , Tfb1m , Tfb2m , Zmpste24
端粒磨损	Pot1 , Rap1a , Terf1 , Terf2 , Tinf2 , Tpp1 .
线粒体功能障碍	Mrpl43 , Ndufb11 , Polrmt , Sirt3 , Sirt6 , Tfam , Tfb1m , Tfb2m .
蛋白质停滞	Arl6ip6 , Bub1b , Foxo1 , Hsf1, Jakmip3 , Rnf144b , Txnip , Vps13c
核纤层疾病	Lmna , Lmnb1 , Lmnb2 , Zmpste24 .
神经变性与突触传递	Calb1 , Gfap , Mbp , Scn2b , Snap23
表观遗传改变	Arid1a , Sirt3 , Sirt6
DNA结合	Arid1a , Ep300, Fbxl16 , Zbtb10 , Zfp9 , Zfr
RNA结合	Elavl1 , Lsm5 , Zfr
炎症反应	Angel2 , Anxa3 , Anxa5 , C1qa , C1qb , C1qc , C1s , C3 , C3ar1 , C4a , C4b , C5ar1 , Ccr1 , Cd14 , Cd163 , Cfh , Cfhr1 , Cx3cl1 , Cxcl16 , Fcer1g , Fcgbp , Fcgr1a , Fcgr2a , Fcgr2b , Gfap , Ltf , Lyzl1 , Mbp , Panx1 , S100a8 , S100a9 , Tlr2 , Tlr4 , Tmem135 , Tmem33 , Tollip
凋亡	Casp1 , Clu , Ep300 , Pdcd6 , Tollip .
细胞衰老	Cdkn1c,Vwa5a
细胞周期	Bub1b , Cdkn1c
细胞骨架调节因子	Col1a1 , Eml1
氧化应激	Ep300
转录调控	Arid1a , Ep300 , Foxo1 , Hsf1 , Phf3 , Smad2

 

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.