产品介绍：

哮喘是一种复杂的综合征，在成人和儿童中都有许多临床表型。T辅助细胞2（Th2）细胞亚型和IgE抗体同种型的过度表达通常表征过敏性炎症，并且细胞和分子在过敏性疾病机制中起重要作用。其他细胞类型也介导Th2和IgE驱动的过敏反应，包括嗜酸性粒细胞，肥大细胞，自然杀伤（NK）细胞和活化的巨噬细胞。一旦被激活，这些细胞释放细胞因子和趋化因子，促进炎症和潜在的组织重塑。许多过敏研究人员关注这些不同细胞类型的相互作用，激活和失调。常见的过敏性疾病包括特应性皮炎和食物过敏。过敏也是哮喘的主要原因，导致气道高反应性（AHR）和慢性炎症。

沃吉基因 过敏与哮喘PCR阵列包括对Th2细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、NK细胞和选择性激活的巨噬细胞的激活和细胞反应重要的细胞因子和其他基因，以及过敏性哮喘特异性基因。

WCGENE®PCRArrayPlate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Allergy & Asthma PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0004-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Abcc1

C1qb

Ccl4

Clca3

Ear11

Gpr44

Il13ra1

Il2ra

Il9

Ms4a2

Rorc

Tpsb2

B

Adam33

C1qc

Ccl5

Cma1

Ear5

Icos

Il13ra2

Il3

Itga4

Muc5ac

Satb1

Tslp

C

Adrb2

Ccl11

Ccr3

Cpa3

Epx

Ifng

Il17a

Il33

Kit

Pdcd1

Stat5a

Il25

D

Alox5

Ccl12

Ccr4

Crlf2

Ets1

Ifngr2

Il17rb

Il3ra

Kitl

Pmch

Stat6

Il5ra

E

Areg

Ccl17

Ccr8

Csf2

Ezr

Il10

Il18

Il4

Ltb4r1

Postn

Tbx21

Mrc1

F

Arg1

Ccl22

Cd40lg

Csf3r

Fcer1a

Il12a

Il1rl1

Il4ra

Maf

Pparg

Tgfb1

Retnlg

G

Bag3

Ccl24

Chia1

Cysltr1

Foxp3

Il12b

Il21

Il5

Mmp9

Prg2

Tnfrsf4

Tnfsf4

H

Bcl6

Ccl26

Chil1

Dab2ip

Gata3

Il13

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Mouse）	相关基因
Th2细胞因子及相关基因	Areg , Ccl11, Ccl12, Ccl17 , Ccl22, Ccl24, Ccl26, Ccl4, Ccl5, Csf2, Icos , Ifng , Il10 , Il12a , Il12b , Il13 , Il17a , Il18 , Il21 , Il25 , Il3 , Il33 , Il4 , Il5 , Il9 , Pdcd1 , Pmch , Tgfb1 , Tnfsf4,Tslp
细胞因子和趋化因子受体	Ccr3 , Ccr4 , Ccr8 , Cd40lg , Crlf2 , Csf3r, Ifngr2 , Il13ra1 , Il13ra2 , Il17rb , Il1rl1  , Il2ra, Il3ra , Il4ra, Il5ra, Tnfrsf4
转录因子	Bcl6 , Ets1 , Foxp3 , Gata3 , Maf , Pparg , Rorc , Satb1 , Stat5a , Stat6 , Tbx21
肥大细胞和IgE	Cma1 , Cpa3 , Fcer1a , Kit, Kitl, Ms4a2 , Tpsb2
嗜酸性粒细胞	Epx , Itga4, Prg2
自然杀伤（NK）细胞	Ifng , Il12a , Il12b , Il13 , Il18 , Il21 , Il33
交替激活的巨噬细胞	Arg1 , Chia1 , Chil1 , Mrc1 , Retnlg
哮喘	Adam33 , Adrb2 , Alox5 , Clca3 , Cysltr1 , Ltb4r1 , Mmp9 , Muc5ac , Postn

过敏与哮喘通路图

图片来源：https://www.kegg.jp/pathway/map05310

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.