产品介绍：

       在蛋白质合成所需的20种氨基酸中，哺乳动物在体内合成非必需氨基酸，必须从饮食或肠道菌群中获得其他必需氨基酸。氨基酸的相关代谢涉及关键信号分子、维生素和辅助因子。这些代谢基因表达的轻微改变会对哺乳动物的代谢产生潜在的不利后果。例如，组氨酸的代谢形成组胺，组胺是过敏反应和血管舒张的中枢代谢物。参与该反应的酶DDC的表达水平可能与受影响个体的过敏敏感性有关。

沃吉基因氨基酸代谢II PCR阵列包括对丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、酪氨酸和缬氨酸代谢重要的基因。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Amino Acid Metabolism II PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0007-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Aadat

Aasdhppt

Aass

Abat

Acadm

Acads

Acadsb

Acat2

Adh5

Adsl

Adss

Agxt

B

Agxt2

Alas1

Aldh2

Aldh3b1

Aldh5a1

Aldh6a1

Aldh7a1

Amdhd1

Amt

Aoc1

Aoc3

Ash1l

C

Asns

Aspa

Bbox1

Bcat1

Bcat2

Bckdha

Bhmt

Bhmt2

Chdh

Cndp1

Comt

Dao

D

Dbh

Dbt

Ddc

Dld

Dlst

Dmgdh

Echs1

Fah

Ftcd

Gad2

Gcat

Gcdh

E

Gldc

Gnmt

Got1

Got2

Gpt

Hadh

Hadhb

Hdc

Hgd

Hibadh

Hibch

Hnmt

F

Hpd

Hsd17b10

Iars

Iars2

Maoa

Mcee

Mif

Mut

Ogdh

Pah

Pcca

Pdha2

G

Phgdh

Pipox

Plod3

Pnmt

Prdx6

Psat1

Psph

Sardh

Sds

Shmt2

Srr

Th

H

Tmlhe

Tpo

Tyr

Tyrp1

Vars2

Wbscr22

Actb

Gapdh

Hprt1

B2m

NTC

NTC

基因分类（Mouse）	相关基因
丙氨酸、天冬酰胺和天门冬氨酸/天冬	Abat,Adsl,Adss,Agxt,Aldh5a1,Asns,Aspa,Gad2,Got1,Gpt
组氨酸代谢	Aldh2,Aldh3b1,Amdhd1,Aoc1,Aspa,Cndp1,Ddc,Ftcd,Hdc,Hnmt,Maoa,Wbscr22
异亮氨酸代谢	Abat,Acadm,Acads,Acadsb,Acat2,Aldh2,Aldh6a1,Bcat1,Bckdha,Dbt,Dld,Echs1,Hadh,Hadhb, Hsd17b10,Iars,Mcee,Mut,Pcca,Pdha2
赖氨酸代谢	Aadat,Aasdhppt,Aass,Acat2,Aldh2,Ash1l,Bbox1,Dlst,Echs1,Gcdh,Hadh,Ogdh,Pipox,Plod3,Tmlhe
苯丙氨酸代谢	Aldh3b1,Aoc3,Ddc,Got1,Hpd,Maoa,Mif,Pah,Prdx6
丝氨酸、甘氨酸和苏氨酸代谢	Agxt,Alas1,Amt,Aoc3,Bhmt,Chdh,Dao,Dld,Dmgdh,Gcat,Gldc,Gnmt,Maoa,Phgdh,Pipox,Psat1,Psph,Sardh,Sds,Shmt2,Srr
酪氨酸代谢	Adh5,Comt,Dbh,Fah,Hgd,Pnmt,Th,Tpo,Tyr,Tyrp1
缬氨酸代谢	Abat,Acadm,Acads,Acadsb,Acat2,Aldh2,Aldh6a1,Bcat1,Bckdha,Dbt,Dld,Echs1,Hadh,Hibadh,Hibch,Mcee,Mut,Pcca,Pdha2,Vars2
辅因子代谢	Alas1,Aldh5a1,Dbt,Dld,Dlst,Ftcd,Hibadh,Mcee,Pipox
维生素代谢	Acadm,Bbox1,Dlst,Hibadh,Psat1,Tmlhe

 

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.