产品介绍：

       高等真核生物有两个血管系统：血液和淋巴。血管系统输送氧气、二氧化碳、营养素、代谢产物、免疫系统细胞、激素和其他因素。淋巴管通过淋巴结和淋巴管收集和运输富含蛋白质的间质液。血管生成和淋巴管生成是这些系统生长的发育机制。

       该通路是参与血管生成的基本蛋白质的简明简化版本。该过程受缺氧调节，导致VEGFF1、FGF2、PDGFbeta、MMP9、MMP2和Ang1的转录。这些蛋白质与受体结合，从而启动导致血管形成的不同途径。

        WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Angiogenesis PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0011-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

AKT1

CCL11

CXCL11

EFNA5

FGF2

ID1

ITGAV

MMP2

PF4

SERPINF1

THBS2

VEGFB

B

ANG

CCL2

CXCL2

EFNB2

FGFR3

IFNA1

ITGB3

MMP9

PGF

SPHK1

TIE1

VEGFC

C

ANGPT1

CDH5

CXCL5

EGF

FIGF

IFNB1

JAG1

NOS3

PLAU

TEK

TIMP1

MMP14

D

ANGPT2

COL18A1

CXCL6

ENG

FLT1

IFNG

KDR

NOTCH4

PLG

TGFA

TIMP2

PECAM1

E

ANGPTL3

COL4A3

CXCL9

EPHB4

FN1

IGF1

LECT1

NRP1

PROK2

TGFB1

TIMP3

SERPINE1

F

ANGPTL4

CTGF

EDN1

ERBB2

HGF

IL1B

LEP

NRP2

PTGS1

TGFB2

TNF

THBS1

G

ANPEP

CXCL1

EFNA1

F3

HIF1A

IL6

MDK

PDGFA

S1PR1

TGFBR1

TYMP

VEGFA

H

BAI1

CXCL10

EFNA3

FGF1

HPSE

IL8

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

NTC

NTC

基因分类（Human）	基因分类
生长因子和受体	ANG、ANGPT1、ANGPT2、ANPEP、FGF1、FGF2、FLT1、JAG1、KDR、NRP1、NRP2、PGF、TYMP、 VEGFA、VEGFB、VEGFC
细胞粘附分子	COL4A3、CXCL8、NRP1、NRP2
细胞外基质（ECM）分子	ANGPTL4、F3、PECAM1、PF4、PROK2、SERPINE1、SERPINF1
其他血管生成因子	NOS3、SPHK1
其他血管生成因子	CCL11，CCL2，CXCL1，CXCL10，CXCL5，CXCL6，CXCL9，EDN1，IFNA1，IFNG，IL1B，IL6，MDK，TNF， AKT1、HPSE、ID1、NOTCH4、PTGS1、TIE1
其他生长因子和受体	CCN2、EFNA1、EFNB2、EGF、EPHB4、FGFR3、HGF、IGF1、ITGB3、PDGFA、S1PR1、TEK、TGFA、 TGFB1、TGFB2、TGFBR1
其他细胞粘附分子	CCL11，CCL2，CCN2，CDH5，COL18A1，ENG，ERBB2，FN1，ITGAV，ITGB3，S1PR1，THBS1，THBS2
其他细胞外基质（ECM）分子F2（凝血酶）	CNMD、LEP、MMP14、MMP2、MMP9、PLAU、PLG、TIMP1、TIMP2、TIMP3

血管生成通路图

 

 

图片来源于： https://www.wikipathways.org/index.php/Pathway:WP1539

 

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.