产品介绍：

三种不同的模式识别受体（PRR）（toll样（TLR），Nod样（NLR）和RIG-I样受体）家族启动先天免疫，先天性一般宿主对常见病原体（例如细菌）的反应。TLR，NLR和其他PRR识别细菌病原体相关分子模式（PAMP），包括脂多糖（LPS），肽聚糖和鞭毛。然后PAMP受体结合激活先天免疫应答，启动下游信号传导，并诱导炎性细胞因子的表达。由免疫和上皮细胞表达和分泌的抗微生物肽也有助于先天免疫应答。它们作为免疫细胞的化学引诱物起作用，直接破坏病原体膜，并且似乎也激活一些PRR信号传导途径。该阵列包括参与细菌激活的PRR信号转导的基因，编码对炎症和细胞凋亡重要的下游效应子，并编码免疫细胞表达抗菌肽。该阵列的结果可以深入了解细菌病原体的先天免疫机制。使用实时PCR，研究研究可以轻松可靠地分析参与该阵列抗菌反应的一组重点基因的表达。

 

WCGENE®PCRArrayPlate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Antibacterial Response PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0013-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Akt1

Card6

Chuk

Hsp90aa1

Il6

Lyz2

Mapk8

Nlrc4

Prdx2

Slc11a1

Tlr4

Xiap

B

Akt2

Card9

Crp

Ifnb1

Irak1

Map2k1

Mefv

Nlrp1a

Prtn3

Slpi

Tlr5

Zbp1

C

Akt3

Casp1

Ctsg

Ikbkb

Irak3

Map2k3

Mpo

Nlrp3

Pstpip1

Sugt1

Tlr6

Nfkbia

D

Apcs

Casp8

Ctsk

Il12a

Irf5

Map2k4

Myd88

Nod2

Pycard

Tab1

Tlr9

Pik3r1

E

Bcl10

Ccl3

Cxcl1

Il12b

Irf7

Map3k7

Naip6

Pik3ca

Rac1

Ticam2

Tnf

Ripk2

F

Birc3

Ccl4

Cxcl3

Il17a

Jun

Mapk1

Nfkb1

Pik3cb

Rela

Tirap

Tnfrsf1a

Tlr2

G

Bpi

Ccl5

Dmbt1

Il18

Lbp

Mapk14

Nfkb2

Pik3cd

Ripk1

Tlr1

Tollip

Traf6

H

Camp

Cd14

Fadd

Il1b

Lcn2

Mapk3

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Rat）		相关基因
Toll样受（TLR）信号	Toll样受体和辅因子	Cd14 , Ctsk , Tlr1 , Tlr2 , Tlr4 ,Tlr5 , Tlr6 , Tlr9
	MYD88依赖	Irak1 , Irak3 , Irf5 , Irf7 , Map3k7, Myd88 , Tab1 , Tirap , Tlr1 , Tlr2 , Tlr4 , Tlr5 , Tlr6 , Tlr9 , Tollip , Traf6
	TICAM1（TRIF）依赖（MYD88非依赖）信号传导	Irf5 , Irf7 , Map3k7, Ripk1 , Tab1 , Ticam2, Tlr4 , Traf6 .
	其他Toll样受体信号基因	Akt1 , Casp8, Lbp , Pik3ca , Pik3r1, Pstpip1 , Rac1
NOD样受（NLR）信号传导	NOD-Like 受体	Naip6 , Nlrc4, Nlrp1a , Nlrp3 , Nod2
	炎性体	Casp1, Naip6, Nlrc4, Nlrp1a, Nlrp3 , Pycard.
	调节 NOD样受体（NLR）信号传导	Birc3, Card6 , Card9 , Casp8 , Hsp90aa1 , Mefv , Ripk2 , Sugt1 , Tnf , Xiap
其他细菌模式识别受体		Apcs , Crp , Dmbt1, Zbp1
NFκB 信号		Bcl10 , Chuk , Ikbkb , Nfkb1 , Nfkbia, Rela , Tnfrsf1a
ERK1/ERK2信号		Jun , Map2k1 , Mapk1 , Mapk3.
JNK/p38信号转导		Jun , Map2k3 , Map2k4 , Mapk14 , Mapk8
细胞凋亡		Akt1 , Birc3, Card6 , Card9 , Casp1 , Casp8, Cd14 , Fadd , Ifnb1 , Ikbkb, Il12a , Il12b , Il1b , Il6 , Irak1 , Jun , Map3k7, Mapk1, Mapk8, Mpo , Nfkb1 , Nfkbia, Pik3ca , Prdx2 , Pycard, Rac1 , Ripk1 , Ripk2 , Tnf ,Tnfrsf1a, Traf6
炎症反应		Akt1 , Apcs , Ccl3, Ccl5 , Cd14 , Crp , Cxcl1 , Cxcl3 , Il1b , Il6 , Lbp , Lyz2 , Mefv , Myd88 , Nfkb1 , Nlrc4 , Nlrp3 , Rac1 , Rela , Ripk2 , Slc11a1 , Ticam2 , Tirap , Tlr1 , Tlr2 , Tlr4 , Tlr5 , Tlr6 , Tlr9 , Tnf , Tnfrsf1a, Tollip .
细胞因子和趋化因子		Ccl3 , Ccl4, Ccl5 , Cxcl1 , Cxcl3 , Ifnb1 , Il12a , Il12b , Il18 , Il1b , Il6
抗微生物肽		Bpi , Camp , Ctsg , Lcn2 , Lyz2 , Mpo , Prtn3 , Slpi

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.