产品介绍：

模式识别受体（PRR）（toll样（TLR），Nod样（NLR）和RIG-I样受体）的三个不同家族启动先天免疫，即先天性一般宿主对常见病原体的反应。在真菌感染的初始阶段，TLR和NLR家族成员以及其他PRR识别真菌病原体相关分子模式（PAMP），包括β-（1,3）-葡聚糖，甘露聚糖和几丁质。然后PAMP受体结合激活先天免疫应答，启动下游信号传导，并诱导炎性细胞因子的表达。一些真菌相关PRR的下游信号传导尚未被广泛表征，但最近的微阵列研究已经鉴定了在真菌感染的初始阶段受影响的许多基因。

沃吉基因抗真菌反应PCR阵列包括参与真菌病原体识别的PRR并代表其下游信号传导途径，还包括对初始白色念珠菌，烟曲霉或新型隐球菌感染有反应的基因，该阵列的结果可以产生对真菌感染的先天免疫机制的了解。

WCGENE®PCRArrayPlate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Antifungal Response PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0012-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Bcl10

Casp8

Cd36

Csf2

F2rl1

Ikbkb

Il1r1

Itgb2

Mbl2

Plcg1

Socs3

Tnf

B

C2

Ccl12

Cd40

Csf3

F3

Il10

Il2

Jun

Mrc1

Plcg2

St3gal5

Traf6

C

C3

Ccl20

Cd5

Cxcl1

Fcgr1a

Il12a

Il23a

Lyn

Myd88

Ptgs2

Stat1

Itgax

D

C3ar1

Ccl5

Cd83

Cxcl10

Fcgr2a

Il12b

Il6

Malt1

Nfkb1

Ptpn6

Syk

Mapk8

E

C4b

Ccl7

Chia

Cxcl11

Fcgr3a

Il15

Irak1

Map2k4

Nfkb2

Pycard

Tirap

Nptx1

F

C5ar1

Ccr1

Clec7a

Cxcl2

Fcnb

Il18

Irak4

Map3k7

Nfkbia

Raf1

Tlr2

Sftpd

G

Card9

Ccr5

Colec12

Cxcl3

Fos

Il1a

Itgam

Mapk14

Nlrp3

Scarf1

Tlr4

Tlr9

H

Casp1

Cd14

Csf1

Cxcl9

Ifng

Il1b

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Rat）		相关基因
真菌模式识别受体（PRR）	β-聚糖反应	Cd36,Cd5,Clec7a ,Itgam,Itgb2,Scarf1,Tlr2.
	甘露糖/几丁质响应	Chia,Mrc1,Tlr2,Tlr4
	其他真菌模式识别受体	Colec12,Nlrp3,Nptx1,Tlr9
信号转导	Dectin-1信号	Bcl10,Card9,Clec7a,Malt1,Plcg2,Raf1,Syk
	NFκB信号	Bcl10,Card9,Casp1,Casp8,Cd40,Ikbkb ,Il10,Il1b,Irak1,Irak4,Malt1,Map3k7,Nfkb1,Nfkbia,Stat1,Tnf
	Toll样受体（TLR）信	Casp8,Cd14,Fos,Irak1,Irak4,Itgb2,Jun,Map2k4 ,Map3k7,Mapk14,Mapk8,Myd88,Nfkb1,Tirap,Tlr2,Tlr4,Tlr9,Traf6
	补体信号	C3,C5ar1,Itgam,Itgb2,Lyn,Mbl2 ,Syk
	NOD样受体（NLR）信号	Card9,Casp1,Nlrp3,Pycard

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.