产品介绍：

细胞凋亡是一种形态学现象。在光学或电子显微镜下观察，凋亡细胞的特征包括染核破裂、质膜起泡、细胞皱缩。最终，细胞分裂成凋亡小体，这些凋亡小体被吞噬作用清除，而不会引发炎症反应。

细胞凋亡由两种不同的途径：外在途径（死亡受体途径）和内在途径（线粒体途径）。

1、外在途径（死亡受体途径）

外在途径是由细胞表面的死亡受体及相关配体引发。死亡受体由TNFR 家族成员（TNFR1/2、Fas 和 DR3/4/5等）组成，其相关配体包括 TNF-α、FasL、TRAIL、TWEAK等。配体结合诱导受体激活，导致死亡诱导信号复合物 (DISC) 的形成，从而激活pro-caspase。该复合体的成员包括衔接蛋白 FADD 和 TRADD，它们招募和激活 caspase-8/caspase-10，然后可以激活下游效应器 caspase（caspase-3、caspase -7）。激活后的caspase可直接降解细胞内的结构蛋白和功能蛋白，引起凋亡。

2、内在途径（线粒体途径）

内在凋亡途径涉及许多保守的信号蛋白，并取决于线粒体的完整性。这个过程受到 Bcl-2 家族中蛋白质活性之间平衡的严格调节，Bcl-2家族由促凋亡（Bax、Bak、Bad、Bid、Puma、Bim 和 Noxa）和抗凋亡（Bcl-2 Bcl-2, Bcl-xL, Bcl-w, Mcl-1) 因子。当具有 BH3 结构域（如 BAD、BID 和 BIM）的促凋亡家族成员在细胞应激期间通过表达变化或通过翻译后修饰被激活时，会触发细胞凋亡。然后促凋亡蛋白 BAX 和 BAK 诱导线粒体外膜通透性 (MOMP) 发生变化，导致细胞色素 c 从细胞器的膜间隙释放。然后游离细胞色素 c 与 Apaf-1 形成称为凋亡小体的复合物，它激活 caspase-9 并触发一系列凋亡事件。

内在和外在途径最终都依赖于半胱天冬酶家族特定成员的蛋白酶活性。这些半胱天冬酶分为两大类。“启动者”caspases-2、-8、-9、-10 和 -12 与上游促凋亡信号紧密耦合，并通过切割和激活下游“执行者”caspases-3、-6 和 - 7起作用，修饰最终负责细胞分解的蛋白质

产品内容：

品名：	Apoptosis PCR Array
种属：	Human
货号：	wc-mRNA0263-H
规格：	96孔板
品牌：	WCGENE ® biotech
产品：	96孔引物预制板，封板膜，说明书
储存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ABL1

BAK1

BCL2L14

BIRC6

CASP2

CASP9

CRADD

GADD45A

NFKB1

TNFRSF10C

TNFRSF9

TRAF3

B

AIFM1

BAX

BCL2L2

BNIP2

CASP3

CD27

CYCS

HRK

NOD1

TNFRSF10D

TNFSF10

XIAP

C

AKT1

BCL10

BFAR

BNIP3

CASP4

CD40

DAPK1

IGF1R

NOL3

TNFRSF11B

TNFSF8

FASLG

D

APAF1

BCL2

BID

BNIP3L

CASP5

CD40LG

DFFA

IL10

PYCARD

TNFRSF1A

TP53

NAIP

E

BAD

BCL2A1

BIK

BRAF

CASP6

CD70

DIABLO

LTA

RIPK2

TNFRSF1B

TP53BP2

TNFRSF10B

F

BAG1

BCL2L1

BIRC2

CASP1

CASP7

CFLAR

FADD

LTBR

TNF

TNFRSF21

TP73

TNFRSF8

G

BAG3

BCL2L10

BIRC3

CASP10

CASP8

CIDEA

FAS

MCL1

TNFRSF10A

TNFRSF25

TRADD

TRAF2

H

BAG4

BCL2L11

BIRC5

CASP14

CASP8AP2

CIDEB

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

NTC

NTC

基因分类(Human)	相关基因
促凋亡	BAD,BAK1,BAX,BCL10,BCL2L11,BID,BIK,BNIP3,BNIP3L,CD27,CD70,CYCS,DFFA,FASLG,GADD45A,HRK,LTA,NOD1,PYCARD,TNFRSF9,TNFSF10,TNFSF8,TP53BP2,TRAF3.
抗凋亡	AKT1,BAG1,BAG3,BCL2,BCL2A1,BCL2L1,BCL2L10,BCL2L2,BFAR,BIRC3,BIRC5,BIRC6,BNIP2,BRAF,CD40LG,CFLAR,IGF1R,IL10,MCL1,NAIP,NFKB1,NOL3,RIPK2,XIAP.
死亡受体及其相关配体	CRADD,DAPK1,FADD,TNFRSF10A,TNFRSF10B,TNFRSF11B,TNFRSF1A,TNFRSF1B,TNFRSF21,TNFRSF25,TRADD,TNF,FAS.
Caspases家族	CASP1,CASP2,CASP3,CASP4,CASP5,CASP6,CASP7,CASP8,CASP9,CASP10,CASP14.

细胞凋亡通路图：

 

图片来源于：https://www.genome.jp/pathway/map04210#

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.