产品介绍：

       自噬是一种自我降解过程，对于平衡发育关键时期的能量来源和应对营养压力非常重要。自噬还在去除错误折叠或聚集的蛋白质、清除受损细胞器（如线粒体、内质网和过氧化物酶体）以及消除细胞内病原体方面发挥作用。自噬还促进细胞衰老和细胞表面抗原呈递，防止基因组不稳定并防止坏死，使其在预防癌症、神经变性、心肌病、糖尿病、肝病等疾病中发挥关键作用。

自噬分为三种定义类型：巨自噬、微自噬和分子伴侣介导的自噬，所有这些都促进溶酶体中细胞溶质成分的蛋白水解降解。

l 巨自噬通过双膜结合囊泡（称为自噬体）的中介将细胞质货物输送到溶酶体，该囊泡与溶酶体融合形成自溶酶体。

l 微自噬中，溶酶体本身通过溶酶体膜的内陷直接吸收细胞溶质成分。宏观和微观自噬都能够通过选择性和非选择性机制吞噬大型结构。

l 分子伴侣介导的自噬 (CMA) 中，靶蛋白与可被溶酶体膜受体溶酶体相关膜蛋白 2A (LAMP-2A) 识别的伴侣蛋白（如 Hsc-70）形成复合物跨溶酶体膜易位，导致它们的折叠和降解。

     自噬发生在四个阶段：诱导、成核、延伸和融合，每个步骤都有调节点。在诱导步骤中，自噬的抑制被许多可能的起始信号级联反应之一解除，涉及 I 类PI3K/Akt/mTOR)、AMPK)、eIF2α、p53、JNK1、IRE-1、IP3R或细胞内钙。囊泡成核发生在第二步，导致吞噬细胞的组装，吞噬细胞的双膜囊泡将吞噬细胞溶质。吞噬细胞在由Vps34 和Vps15 和 Beclin1 组成的蛋白质复合物组装后开始形成，其启动 Vps34 酶活性以磷酸化磷脂酰肌醇以生成 3-磷酸磷脂酰肌醇 (PI3P)。 PI3Ps 的存在将含有 FYVE 和 PX 结构域的蛋白质募集到膜上，将其标记为自噬细胞。自噬细胞在自噬的第三步通过泛素 E3 连接酶复合物延长，该复合物由自噬蛋白 (Atg) Atg5、Atg12 和 Atg16L1 组成，将磷脂酰乙醇胺 (PE) 与微管相关蛋白 1A/1B、轻链 3 (LC3 ）。 LC3-PE 保持与吞噬细胞的内膜和外膜结合，因为它在长度上延伸，直到它完全吞没其货物成为自噬体。在自噬的最后融合步骤中，自噬体与溶酶体融合形成自溶酶体，自噬溶酶体通过水解酶降解其内容物，并将剩余物质输出到细胞质中以供再利用。

产品内容     

品名：	Autophagy PCR Array
种属：	Human
货号：	WC-MRNA0060-H
规格：	96孔板
品牌：	WCGENE ® biotech
产品：	96孔引物预制板，封板膜，说明书
储存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

           

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

AKT1

ATG16L2

ATG9A

BID

CTSD

ESR1

Hdac10

INS

MAPK14

PRKAA1

TGFB1

UVRAG

B

AMBRA1

ATG3

ATG9B

BNIP3

CTSS

FADD

HDAC6

IRF8

MAPK8

PTEN

TGM2

WIPI1

C

APP

ATG4A

BAD

CASP3

CXCR4

FAS

HGS

IRGM

MTOR

RAB24

TMEM74

IGF1

D

Arsa

ATG4B

BAK1

CASP8

DAPK1

GAA

HSP90AA1

LAMP1

NFKB1

RB1

TNF

MAP1LC3B

E

Arsb

ATG4C

BAX

CDKN1B

DRAM1

GABARAP

HSPA8

LAMP2

NPC1

RGS19

TNFSF10

PIK3R4

F

ATG10

ATG4D

BCL2

CDKN2A

DRAM2

GABARAPL1

HTT

LAMP3

PIK3C3

RPS6KB1

TP53

SQSTM1

G

ATG12

ATG5

BCL2L1

CLN3

EIF2AK3

GABARAPL2

IFNG

MAP1LC3A

PIK3CG

SNCA

ULK1

ULK2

H

ATG16L1

ATG7

BECN1

CTSB

EIF4G1

HDAC1

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Human）	相关基因
自噬液泡的形成	AMBRA1,ATG12,ATG5,ATG9B,BECN1,GABARAPL1,IRGM,MAP1LC3A,MAP1LC3B,RGS19,ULK1,WIPI1.ATG4A
转运蛋白	ATG10,ATG16L1,ATG16L2,ATG3,ATG4A,ATG4B,ATG4C,ATG4D,ATG7,ATG9A,GABARAP,GABARAPL2,RAB24
伴侣介导的自噬	HSP90AA1,HSPA8
自噬的调节	AKT1,APP,BAD,BAK1,BAX,BCL2,BCL2L1,BID,BNIP3,CASP3,CASP8,CDKN1B,CDKN2A,CLN3,CTSB,CXCR4,DAPK1

细胞自噬通路图

图片来源于:https://www.genome.jp/pathway/map04140

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.