产品介绍

      脑源性神经营养因子（BDNF）是一种对神经元的生长、分化、可塑性和存活至关重要的神经营养因子。BDNF也是能量代谢、行为、心理健康、学习、记忆、压力、疼痛和细胞凋亡等过程所必需的。BDNF与各种神经元疾病有关，如阿尔茨海默病、亨廷顿舞蹈症、抑郁症和双相情感障碍。

      BDNF结合酪氨酸激酶受体，称为原肌球蛋白相关激酶B（TrkB）。它还以低亲和力与p75神经营养因子受体（p75NTR）结合。BDNF及其受体在整个中枢和外周神经系统中表达。

      当BDNF二聚化并与TrkB结合时，引发BDNF信号传导，导致受体二聚化和自身磷酸化。受体的激活导致其与分子如Shp2、Shc和PLCγ的相互作用。这些分子进一步相互作用并修饰其下游靶标，从而导致各种神经元过程。BDNF激活信号级联，如PLC/PKC、PI3K/Akt、Ras/Erk、AMPK/ACC和NFκB通路。BDNF通过PLC/PKC途径导致细胞内钙的释放和突触可塑性的调节。它还通过cAMP/PKA信号维持突触可塑性。通过BDNF/TrkB相互作用激活PI3K/Akt通路通过降低BIM的表达抑制细胞凋亡。然而，BDNF/p75NTR相互作用通过TRAF6激活JNK，从而导致细胞凋亡。JNK3的激活也导致TACE对p75NTR的蛋白水解切割。PI3K/Akt还导致mTOR途径的激活，随后导致蛋白质合成。Ras/Erk信号传导参与细胞增殖、分化和神经元保护。BDNF还通过Erk5/Mef途径导致神经元存活。Erk1/2对突触素的磷酸化导致神经递质的释放。BDNF信号传导通过NFκB途径导致一氧化氮的产生。BDNF通过激活JAK/STAT、Rac和Cdc42途径诱导轴突生长。BDNF通过AMPK介导的ACC抑制来增强脂肪的氧化。它还通过抑制GSK3β在微管组装中发挥作用。它通过激活NCF分子导致氧化性神经元坏死。BDNF还调节AMPA和NMDA受体的表面表达。BDNF还调节导致树突分化和成牙骨质细胞样细胞钙化等过程的基因表达。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	BDNF Signaling PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	wc-mRNA0224-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ACACB

CEBPB

ELK1

GRIN1

MAP2K1

MAPK9

NFKB1

PDPK1

PTPRF

RHOG

SRC

egr3

B

AKT1

CFL1

FRS2

GRIP1

MAP2K5

MEF2C

NGF

PIK3CA

RAB3A

RPS6KA1

STAT1

rsk

C

BDNF

CNR1

FYN

HRAS

MAP3K1

NCAM1

NGFR

PIK3R1

RAC1

RPS6KA3

STAT3

NTRK3

D

CAMK1

CREB1

GABRB1

IRS1

MAPK1

NCF1

NSF

PLCG1

RAF1

RPS6KA5

STAT5A

PTPN11

E

CDC42

CTNNB1

GRB2

IRS2

MAPK10

NCF2

NTF3

PRKAA1

RANBP9

RPS6KB1

STAT5B

RELA

F

CDH2

DLG1

GRIA1

JAK2

MAPK14

NCK1

NTRK1

PRKCD

RAP1A

SHC1

SYN1

SQSTM1

G

CDK5

DOCK3

GRIA2

JUN

MAPK3

NCK2

NTRK2

PTK2B

RASGRF1

SORT1

TIAM1

VAV2

H

CDK5R1

DOK5

GRIA3

LINGO1

MAPK8

NFATC4

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.