产品介绍：

乳腺癌是一种异质性疾病，从分子水平上分为正常乳腺样、管腔型、HER2样和基底样（也称为三阴性）肿瘤。

对致癌机制的深入研究发现，失调的基因可能是由于体细胞突变引起的功能改变，基因表达改变或翻译后修饰改变。基因表达的致癌变化影响细胞信号传导和整个生物途径的功能。对这些失调基因的集中研究及其与已知肿瘤分类标志物的一致性可以确定这种致命疾病的乳腺癌发生，发展或转移的潜在分子机制。该阵列包括涉及肿瘤分类，信号转导和其他通常受影响的途径（例如血管生成，粘附，蛋白水解，细胞周期和凋亡）的基因。

WCGENE®PCRArrayPlate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Breast Cancer PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0016-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ABCB1

BAD

CCND2

CDKN1C

EGFR

GSTP1

KRT18

MKI67

NOTCH1

RARB

SNAI2

VEGFA

B

ABCG2

BARD1

CCNE1

CDKN2A

ERBB2

HIC1

KRT19

MLH1

NR3C1

RASSF1

SRC

XBP1

C

ABL1

BCL2

CDH1

CERK

ESR1

ID1

KRT5

MMP2

PGR

RB1

TFF3

MGMT

D

ADAM23

BIRC5

CDH13

CSF1

ESR2

IGF1

KRT8

MMP9

PLAU

SERPINE1

TGFB1

NME1

E

AKT1

BRCA1

CDK2

CST6

FOXA1

IGF1R

MAPK1

MUC1

PRDM2

SFN

THBS1

PYCARD

F

APC

BRCA2

CDK4

CTNNB1

GATA3

IGFBP3

MAPK3

MYC

PTEN

SFRP1

TP53

SLIT2

G

AR

CCNA1

CDK7

CTSD

GLI1

IL6

MAPK8

MYT1

PTGS2

SLC39A6

TP73

TWIST1

H

ATM

CCND1

CDKN1A

EGF

GRB7

JUN

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Human）		相关基因
乳腺癌分类标记	Luminal A-C乳腺癌	ESR1,FOXA1,GATA3,KRT18,KRT8,SLC39A6,TFF3,XBP1
	HER2样乳腺癌	ERBB2 ,GRB7
	基底样/三阴性乳腺癌	BIRC5,EGFR,KRT5,NOTCH1
	乳腺癌转移到肺部	ID1,MMP2,PTGS2
信号 转导	类固醇受体介导的信号传导	AR,BRCA1,CCNE1,CTNNB1,ESR1,ESR2 ,IGF1,KRT19,PGR,RB1
	Hedgehog 信号	BCL2,CCND1,GLI1,SNAI2
	糖皮质激素信号	IGFBP3,NME1,NR3C1
	经典WNT信号	APC,CCND1,CTNNB1,SFRP1
	AKT和PI3K信号	AKT1,ERBB2,IGF1,IGF1R,PTEN
	Notch 信号	BIRC5,NOTCH1
	MAPK信号	MAPK1 ,MAPK3,MAPK8,TP73.
上皮-间充质转换（EMT）(EMT)		CTNNB1,NOTCH1,SRC,TGFB1,TWIST1.
血管生成		CDH13,CTNNB1,EGF,ERBB2,ID1,IL6,JUN,NOTCH1,PLAU,PTEN,SERPINE1,SLIT2,THBS1,VEGFA.
细胞粘附分子		ADAM23,APC,BCL2,CDH1 ,CDH13,CDKN2A ,CSF1,CTNNB1,EGFR,ERBB2 ,PTEN,TGFB1,THBS1
蛋白酵素		ADAM23,CST6,CTSD,MMP2,MMP9,PLAU,PYCARD
细胞凋亡		AKT1,APC,BAD,BCL2,CDH1,CDKN1A ,CDKN2A,GSTP1,IGF1,IL6,JUN,MUC1,NME1,RARB,SFN,SFRP1,TP53,TP73,TWIST1.
细胞周期		APC,BCL2,CCNA1,CCND1,CCND2,CCNE1,CDK2,CDKN1A,CDKN1C ,CDKN2A ,JUN,MKI67,MYC,PTEN,RASSF1,RB1,SFN ,TP53.
DNA损伤与修复		APC,ATM,BRCA1,BRCA2,CCND1,CDKN1A ,MAPK1,MGMT,MLH1,SFN,TP53,TP73.
异生素运输		ABCB1,ABCG2.
转录因子		AR,CTNNB1,ESR1,ESR2,FOXA1,GATA3,HIC1,JUN,MYC,NOTCH1,NR3C1,PGR,PRDM2,RARB,RB1,TP53,TP73,XBP1.

乳腺癌通路图

图片来源：https://www.wikipathways.org/index.php/Pathway:WP4262#nogo2

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.