产品介绍：  

结肠直肠癌代表了相对较好的特征性肿瘤发生范例，并且结肠直肠癌是癌症相关死亡的主要原因之一。结直肠癌是遗传改变积累的结果。基因组不稳定性产生允许状态，其中潜在的癌细胞被允许获得足够的突变以成为癌细胞。几种形式的基因组不稳定性在结肠癌中很常见：MSI（微卫星不稳定性），CIN（染色体不稳定性）和染色体易位。MSI发生在大约15%的结肠癌中，其原因是继发于MMR基因突变或MMR基因启动子超甲基化的MMR（错配修复）系统失活。它通过在具有编码微卫星重复序列的靶基因中产生突变来促进肿瘤发生。CIN发生在大多数其他结肠癌中，并导致不同的基因改变模式，最终导致肿瘤形成。这似乎是由控制有丝分裂，DNA损伤修复，中心体结构和功能以及DNA复制中其他基本过程的基因突变引起的。通常，结直肠癌进展中的遗传改变是由基因组不稳定的两个独立且不同的潜在途径之一决定的。第一种途径CNI的特征是等位基因缺失，LOH（杂合性缺失），非整倍性，二倍体，多倍体，端粒缩短和甲基化。第二种途径MSI的特征是大量细微的DNA突变。虽然导致染色体不稳定的基因仍然未知，但MSI是由DNA错配修复基因失活引起的，主要是MLH1（MutL同系物-1）或MSH2。影响这种基因变异的主要环境因素包括病原体的入侵（细菌和病毒感染），毒素，压力，多胺，炎症和ROS（活性氧）的产生。MSI和CIN突变主要改变WNT（无翼型MMTV整合位点家族），CdhE（上皮钙粘蛋白），前列腺素，EGFR（表皮生长因子受体），TGF-βR（转化生长因子β受体）和DCC在结肠直肠癌中缺失）信号传导途径以促进结肠直肠癌的增殖。这些信号传导途径充当人类肿瘤发展的检查站。

WCGENE®PCRArrayPlate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	COLORECTAL CANCER METASTASIS PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0168-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

AKT1

BRAF

DCC

GRB2

LEF1

MAPK3

MSH6

PIK3R2

RELB

TCF3

TLR3

WNT1

B

APC

CASP3

DVL1

GSK3B

LRP5

MLH1

MYC

PRKACA

SMAD2

TCF4

TLR4

WNT3A

C

APPL1

CASP9

E2F4

IFNG

LRP6

MMP1

NFKB1

PRKAR1A

SMAD3

TGFB1

TLR7

PIK3R1

D

ARRB1

CCND1

EGF

IFNGR1

MAP2K1

MMP14

NFKB2

PTGER2

SMAD4

TGFB2

TLR9

RELA

E

AXIN2

CCND2

EGFR

IL6

MAP2K2

MMP2

NOS2

PTGER4

SOS1

TGFB3

TNF

STAT3

F

BAX

CDH1

FZD1

IL6R

MAP2K4

MMP7

PIK3CA

PTGS2

SRC

TGFBR1

TNFRSF1A

TLR2

G

BCL2L1

CDKN1A

GNAS

JAK1

MAP2K6

MMP9

PIK3CB

REL

STAT1

TGFBR2

TP53

VEGFA

H

BIRC5

CTNNB1

GNB3

KRAS

MAPK1

MSH2

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

结肠直肠癌转移通路图

图片来源于：https://www.kegg.jp/kegg-bin/show_pathway?map05210

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.