产品介绍：

       除了上皮细胞和基质细胞外，肿瘤微环境还包含几种细胞类型的先天性和适应性免疫系统，包括B淋巴细胞和T淋巴细胞、树突状细胞和巨噬细胞。针对通过MHC I类分子呈现的肿瘤相关抗原，或Toll样受体识别的异常分子模式，免疫系统使用各种效应酶和促凋亡信号（包括TRAIL和FAS配体）的参与来消除靶细胞。如果正常的体内平衡不能很快得到解决，就会出现慢性炎症状态，包括局部活性氧和氮水平升高，从而促进基因组不稳定。免疫细胞产生多种细胞因子来协调炎症反应，炎症反应由正反馈回路推动，正反馈回路通常涉及肿瘤细胞中的STAT和NFkB信号通路。由此产生的抗凋亡和免疫抑制因子的上调使转化细胞能够在免疫系统的抑制下增殖。在癌症进展过程中，可以利用协调正常免疫反应的趋化因子、细胞因子和生长因子，创造一种免疫抑制状态，促进侵袭和转移。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Cancer Inflammation & Immunity Crosstalk PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0021-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Aicda

Ccl4

Ccr9

Cxcl1

Cxcr2

Foxp3

Il10

Il1r1

Micb

PDL1

Stat3

Tp53

B

Bcl2

Ccl5

CD163

Cxcl10

Cxcr3

Gbp1

Il12a

Il2

Mif

Ptgs2

Tgfb1

Vegfa

C

Bcl2l1

Ccr1

CD206

Cxcl11

Cxcr4

Gzma

Il12b

Il22

MMP

ptsg2

Tlr2

Il1b

D

Ccl2

Ccr10

Cd274

Cxcl12

Cxcr5

Gzmb

Il13

Il23a

Myc

RT1-A1

Tlr3

Kitlg

E

Ccl20

Ccr2

Csf1

Cxcl2

Cxcr7

Hif1a

Il15

Il4

Myd88

RT1-N2

Tlr4

Pdcd1

F

Ccl21

Ccr4

Csf2

Cxcl5

Egf

Ido1

Il17a

Il6

Nfkb1

SOCS3

Tlr7

Stat1

G

Ccl22

Ccr5

Csf3

Cxcl9

Egfr

Ifng

Il1a

Irf1

Nos2

Spp1

Tnf

Tnfsf10

H

Ccl28

Ccr7

Ctla4

Cxcr1

Faslg

Igf1

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Rat）	相关基因
免疫和炎症反应	免疫刺激因子Ifng,Il12a,Il12b,Il15,Il2,Tnf免疫抑制因Cd274 ,Csf2,Ctla4,Cxcl12,Cxcl6,Ido1,Il10,Il13,Il4,Mif,Nos2 ,Pdcd1 ,Ptgs2 ,Tgfb1,Vegfa促炎基因Ccl2 ,Ccl20,Ifng,Il12a,Il12b,Il17a,Il1a,Il1b,Il2,Il22,Il23a,Il6,Ptgs2 ,Tlr4,Tnf,Vegfa抗炎基因Il10,Il13,Il4,Tgfb1
炎症和免疫的酶调节剂	Aicda,Gzma,Gzmb,Ido1,Nos2,Ptgs2
抗原呈递	Micb,RT1-A1,RT1-N2.
趋化因子	Ccl2 ,Ccl20 ,Ccl21,Ccl22,Ccl28,Ccl4,Ccl5,Cxcl1,Cxcl10 ,Cxcl11,Cxcl12,Cxcl2 ,Cxcl6,Cxcl9
趋化因子受体	Ackr3,Ccr1,Ccr10,Ccr2,Ccr4,Ccr5,Ccr7,Ccr9,Cxcr1,Cxcr2,Cxcr3,Cxcr4,Cxcr5,Il1r1
白细胞间介素	Il10,Il12a,Il12b,Il13,Il15,Il17a,Il1a,Il1b,Il2,Il22,Il23a,Il4,Il6
其他细胞因子	Kitlg ,Mif,Spp1,Tnf,Tnfsf10
生长因子和受体	Csf1,Csf2 ,Csf3,Egf,Egfr,Igf1,Tgfb1,Vegfa
干扰素信号	Gbp1,Ifng,Il6,Irf1
干扰素反应基因	Ccl2 ,Ccl5 ,Cxcl10,Cxcl9,Gbp1,Irf1,Myd88,Stat1,Tlr3,Tnfsf10
NFκB靶点	Bcl2l1,Ccl2,Ccl5,Csf1,Csf2,Csf3,Ifng,Tnf
STAT 靶点	Ccl2 ,Ccl4,Ccl5 ,Csf1,Csf2,Csf3,Cxcl10,Cxcl11,Cxcl12,Cxcl9,Il10,Il17a,Il1b,Il23a,Il6,Myc
Toll样受体信号	Myd88,Tlr2,Tlr3,Tlr4,Tlr7
转录因子	Foxp3,Hif1a,Irf1,Myc,Nfkb1,Stat1,Stat3,Tp53
细胞凋亡	促凋亡Faslg,Tnf,Tnfsf10 ,Tp53 抗凋亡Bcl2,Bcl2l1 ,Myc,Stat3

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.