产品介绍：

       细胞凋亡，或程序性细胞死亡，通过半胱天冬酶的作用以及抗炎细胞因子的释放，导致受控的细胞收缩和分裂。相反，坏死信号通过RIPK1（RIP1），导致细胞肿胀、溶解和促炎细胞因子释放。自噬通过溶酶体中的细胞内分解代谢过程破坏细胞受损的蛋白质和细胞器。多种细胞过程需要通过受控细胞死亡程序去除特定细胞。例如，组织重塑激活细胞凋亡，而能量代谢和生长调节反应依赖于自噬。发展过程通常会激活细胞凋亡，而身体损伤或感染更常见地诱发坏死。这些细胞死亡途径背后的分子机制重叠，在某些细胞功能期间，同时发生多种形式的细胞死亡。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Cell Death PathwayFinder PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0025-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ABL1

ATG7

BECN1

CASP6

COMMD4

EIF5B

GRB2

JPH3

OR10J3

SNCA

TNFRSF10B

ULK1

B

AKT1

ATP6V1G2

BIRC2

CASP7

CTSB

ESR1

HSPBAP1

KCNIP1

PARP1

SPATA2

TNFRSF11B

XIAP

C

APAF1

BAX

BIRC3

CASP8

CTSS

FAS

HTT

MAG

PARP2

SQSTM1

TNFRSF1A

IRGM

D

APP

BCL2

BMF

CASP9

CYLD

FASLG

IFNG

MAP1LC3A

PIK3C3

SYCP2

TP53

NOL3

E

ATG12

BCL2A1

C1ORF159

CCDC103

DEFB1

FOXI1

IGF1

MAPK8

PVR

TGFB1

TRAF1

S100A7A

F

ATG16L1

BCL2L1

CASP1

CD40

DENND4A

GAA

IGF1R

MCL1

RAB25

TMEM57

TRAF2

TNFRSF10A

G

ATG3

BCL2L11

CASP2

CD40LG

DFFA

GADD45A

INS

NFKB1

RPS6KB1

TNF

TRAF3

TXNL4B

H

ATG5

BCL2L2

CASP3

CFLAR

DPYSL4

GALNT5

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

NTC

NTC

基因分类（Human）	相关基因
细胞凋亡	ABL1,APAF1,ATP6V1G2,BAX,BCL2L11,BIRC2 ,CASP1 ,CASP3,CASP6,CASP7,CASP9,CD40 ,CD40LG,CFLAR,CYLD,DFFA,FAS,FASLG ,GADD45A,NOL3,SPATA2,SYCP2,TNF,TNFRSF10A,TNFRSF1A ,TP53.AKT1,BCL2,BCL2A1,BCL2L1,BIRC3 ,CASP2,IGF1R,MCL1,TNFRSF11B ,TRAF2,XIAP
自噬	AKT1,APP,ATG12,ATG16L1,ATG3,ATG5,ATG7,BAX,BCL2,BCL2L1 ,BECN1,CASP3,CTSB,CTSS,ESR1,FAS,GAA,HTT,IFNG,IGF1,INS,IRGM,MAP1LC3A,MAPK8,NFKB1,PIK3C3 ,RPS6KB1,SNCA,SQSTM1,TNF,TP53 ,ULK1.
坏死	ATP6V1G2,BMF,C1orf159,CCDC103,COMMD4,CYLD,DEFB1,DENND4A,DPYSL4,EIF5B,FOXI1,GALNT5,GRB2,HSPBAP1,JPH3,KCNIP1,MAG,OR10J3,PARP1,PARP2,PVR,RAB25,S100A7A,SPATA2,SYCP2,TNFRSF1A ,TXNL4B

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.