产品介绍：

在胚胎发育过程中，多能干细胞分化为三个胚层：外胚层，中胚层和内胚层。这些胚层最终分化成多能干细胞（祖细胞），其进入终末分化的细胞。这些发育过程需要严格调节并仔细定时的基因表达变化。对这些基因的分析可以提示中间或终末分化细胞的身份，和/或研究的分化过程的机制。该阵列包含整个细胞谱系进程中特定细胞类型的基因标记，包括多能干细胞，来自三个胚层中每一个的祖细胞和终末分化的细胞。

WCGENE®PCRArrayPlate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Cell Lineage Identification PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0027-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Acan

CD127

Chat

Dpp4

Gad1

Gfap

Itgb4

Msln

Nkx2-2

Prom1

Slc2a2

Tyr

B

Alb

Cd34

Col10a1

Eno1

Gad2

Hand1

Krt10

Myh11

Nppa

Ptcra

Slc32a1

Zic1

C

Apoh

CD34

Comp

Fabp7

Galc

Hand2

Krt14

Myh7

Olig2

Rcvrn

Smtn

Mixl1

D

Aqp1

CD38

Cpa1

Fgf5

Gata1

Hes5

Krt19

Myl3

Otx2

Runx1 (Aml1)

Sox17

Neurog2

E

Bmp4

Cd3e

Ctsk

Foxa1

Gata2

Hnf4A

Lefty1

Myod1

Pdgfra

Sftpb

Sox2

Pou5f1 (Oct4)

F

Cav3

CD45RA

Dcn

Foxd3

Gata6

Ibsp

Map3k12

Nanog

Podxl

Sftpd

Sox7

Slc17a7

G

Ccr5

CD7

Dcx

Foxg1

Gbx2

Igf2

Miox

Neurod1

Pou4f2

Slc17a6

T (Brachyury)

Tat

H

CD10

Cd79a

Dnmt3b

G6pc

Gdf3 (Vgr-2)

Ins2

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Rat）	相关基因
多能性标记	Dnmt3b,Gdf3 ,Lefty1,Nanog,Podxl,Pou5f1
胚层	外胚层Fgf5,Foxd3,Otx2,Zic1.神经外胚层Gbx2,Neurog2.中胚Bmp4,Cd34,Dcn,Gata2,Hand1,Igf2,Mixl1,Pdgfra,Runx1,Tbxt内胚层Foxa1,Gata1,Gata6,Hnf4a,Sox17,Sox7.
外胚层 祖细胞	神经元祖细胞Fabp7,Hes5,Prom1,Sox2.未成熟的神经元Dcx.未成熟的GABA神经元Gad2,Slc32a1.角膜缘祖细Eno1,Msln.运动神经元祖细胞Foxg1,Olig2.少突胶质细胞祖细胞Nkx2-2,Olig2.
中胚层 祖细胞	早期心肌细胞Hand2.早期B细胞Cd79al.早期T细胞Cd3e,Ptcra.肌肉干细胞Cd34.
内胚层 祖细胞	胰岛细胞Krt19.肝干细胞Apoh,Dpp4,Map3k12.
外胚层终端分化标记	角蛋白细胞Krt10,Krt14.黑色素细胞Tyr.成熟的神经元Neurod1.胆碱能神经元Chat.GABA神经元Gad1.谷氨酸能神经元Slc17a6,Slc17a7.星形细胞Galc,Gfap.神经节细胞Pou4f2.感光细胞Rcvrn.
中胚层终端分化标记	骨骼肌细胞Cav3,Myod1.平滑肌细胞Myh11,Smtn.心肌细胞Myh7,Myl3,Nppa.成骨细胞Ibsp.破骨细胞Ctsk.软骨细胞Acan,Col10a1,Comp.巨噬细胞Ccr5.
内胚层终端分化标记	肝实质细胞Alb,G6pc,Tat.胆管细胞Itgb4.β细胞Ins2,Slc2a2.外分泌细胞Cpa1.肺细胞Sftpb,Sftpd.近端小管细胞Aqp1,Miox.

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.