产品介绍：

       细胞衰老是一种不可逆的细胞停滞状态，可由许多因素触发，如端粒缩短、癌基因激活、辐射、DNA损伤和氧化应激。其特征是扩大的扁平形态、衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-b-gal）活性、炎性细胞因子、生长因子和基质金属蛋白酶的分泌，作为衰老相关分泌表型（SASP）的一部分。细胞衰老在功能上与许多生物学过程有关，包括衰老、肿瘤抑制、胎盘生物学、胚胎发育和伤口愈合。 在正常的复制衰老中，细胞在一定数量的复制后简单地进入衰老。然而，应激诱导的衰老导致细胞由于各种应激而过早地启动衰老，包括DNA损伤，氧化应激，干扰素相关反应和通过胰岛素生长因子（IGF）或丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）的信号传导。事实上，一些假设衰老程序最初是作为一种抗病毒机制进化而来的。

       WCGENE®PCRArrayPlate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Cellular Senescence PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0031-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Abl1

Akt1

Aldh1a3

Atm

Bmi1

Calr

Ccna2

Ccnb1

Ccnd1

Ccne1

Cd44

Cdc25c

B

Cdk2

Cdk4

Cdk6

Cdkn1a

Cdkn1b

Cdkn1c

Cdkn2a

Cdkn2b

Cdkn2c

Cdkn2d

Chek1

Chek2

C

Cited2

Col1a1

Col3a1

Creg1

Cspg2

Cxcl14

Doc1

E2f1

E2f3

Egr1

Ets1

Ets2

D

Fn1

Gadd45a

Glb1

Gsk3b

Hras1

Id1

Ifng

Igf1

Igf1r

Igf2

Igfbp3

Igfbp5

E

Igfbp7

Ing1

Irf3

Irf5

Irf7

Map2k1

Map2k3

Map2k6

Mapk14

Mdm2

Morc3

Myc

F

Nbn

Nfkb1

Nox4

Pcna

Pik3ca

Plau

Plxdc2

Prkcd

Pten

Rb1

Rbl1

Rbl2

G

Serpinb2

Serpine1

Sirt1

Sod1

Sod2

Sparc

Tbx2

Tbx3

Terf2

Tert

Tgfb1

Tgfb1i1

H

Thbs1

Trp53

Trp53bp1

Twist1

Vim

Wnt5a

Actb

Gapdh

Hprt1

B2m

NTC

NTC

基因分类（Mouse）	相关基因
衰老途径	Atm,Bmi1,Ccnd1,Ccne1,Cdk2,Cdk4,Cdk6,Cdkn1a,Cdkn2a,Cdkn2d,Chek1,Chek2,E2f1,E2f3,Ets1,Ets2, Mdm2、Rb1、Rbl2、Trp53、Twist1
衰老引发剂	p53/pRb信号与细胞周期ABL1,Akt1,Aldh1a3,Ccna2,Ccnb1,Cdc25c,Cdkn1c,Cdkn2b,Cdkn2c,Cited2,Creg1,Gsk3b,Id1,Igf1r,Igfbp3,Ing1,Map2k6,Mapk14,Morc3,Myc,Pcna,Pik3ca,Plau,Rbl1,Serpinb2,Sirt1,Sparc,Tgfb1
干扰素信号	Aldh1a3，Cdkn1a，Cdkn1b，Egr1，Ifng，Igfbp3，Igfbp7，Irf3，Irf5，Irf7，Nfkb1，Rb1，Serpinb2
胰岛素生长因子（IGF）相关的	Igf1、Igf1r、Igfbp3、Igfbp5、Igfbp7
MAP激酶信号	Hra，Map2k1，Map2k3，Map2k6，Mapk14
氧化应激	Aldh1a3、Hra、Mapk14、Nox4、Prkcd、Sod1、Sod2。
DNA损伤与修复	Atm、Gadd45a、Nbn、Pcna、Terf2、Tert、Trp53bp1
衰老反应	p53效应子Aldh1a3、E2f1、HRA、Igfbp3、Myc。p16效应器TBX2、Tbx3
细胞骨架调节因子	Akt1、Fn1、HRA、Pik3ca、Plau、Serpine1、Sparc、Thbs1、Vim
细胞粘附分子	Cd44、Col1a1、Col3a1、Tgfb1、Tgfb1i1、Thbs1
其他衰老反应基因	glb1，Pten

细胞衰老通路图

 

图片来源于：https://www.kegg.jp/pathway/map04218

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.