产品介绍

       霍乱毒素（CTX）是霍乱弧菌的主要毒力因子之一。一旦分泌，CTX B链（CTXB）就会与宿主细胞表面的神经节苷脂GM1结合。结合发生后，整个CTX复合物从质膜（PM）携带到内质网（ER）。在内质网中，A链（CTXA）被蛋白二硫化物异构酶（PDI）识别、展开并递送到膜，在膜相关的内质网氧化酶Ero1氧化PDI，将CTXA释放到蛋白传导通道Sec61中。然后，CTXA被逆向转运到胞质溶胶中，并通过腺苷酸环化酶（AC）增加cAMP水平来诱导水和电解质分泌，从而发挥毒性。

除了CTX，霍乱弧菌还会产生几种对真核细胞有危险的毒素。闭塞带毒素（ZOT）通过蛋白激酶C依赖性肌动蛋白聚合引起紧密连接破坏。RTX毒素（RtxA）通过将肌动蛋白单体共价交联为二聚体、三聚体和高级多聚体来引起肌动蛋白解聚。霍乱弧菌溶细胞素（VCC）是一种重要的造孔毒素。VCC阴离子通道在细胞中的组装导致空泡化和裂解。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Cholera Infection PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0175-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ACTA1

ADCY5

AK5

CLCA2

CLCN7

CNGB1

KCNK4

PLCD3

PRKCG

SCN1A

SCN8A

SEC61B

B

ACTA2

ADCY6

AK7

CLCA4

CLIC1

CNGB3

KCNK9

PLCD4

PRKCH

SCN1B

SCN9A

SEC61G

C

ACTG1

ADCY7

ARF1

CLCN1

CLIC2

ERO1L

PDIA4

PLCG1

PRKCI

SCN2A

SCNN1A

PLCD1

D

ACTG2

ADCY8

ARF3

CLCN2

CLIC4

GNAS

PLCB1

PLCG2

PRKCQ

SCN2B

SCNN1B

PRKCE

E

ADCY1

ADCY9

ARF4

CLCN3

CLIC5

HSPG2

PLCB2

PRKCA

PRKCZ

SCN3A

SCNN1D

SCN10A

F

ADCY2

AK1

ARF5

CLCN4

CLNS1A

KCNK1

PLCB3

PRKCB

PRKD1

SCN3B

SCNN1G

SCN5A

G

ADCY3

AK2

ARF6

CLCN5

CNGA1

KCNK2

PLCB4

PRKCD

PRKD3

SCN4A

SEC61A1

SEC61A2

H

ADCY4

AK3

CLCA1

CLCN6

CNGA3

KCNK3

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

霍乱感染通路图：

   图片来源于：https://www.kegg.jp/kegg-bin/show_pathway?map05110

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.