产品介绍：

昼夜节律的同步或“夹带”通过大脑中下丘脑视交叉上核（SCN）的光刺激和外周组织中SCN的激素信号发生。在转录和翻译后水平上相互作用的正和负昼夜基因反馈回路建立了昼夜节律“振荡器”，并确保对转录因子调节昼夜节律中所需的适当基因的表达。受昼夜节律调控的基因参与了影响生理、新陈代谢和行为的多种生物过程。尽管其“输出”途径中的昼夜节律靶基因因组织而异，但由中央时钟和时钟控制基因编码的转录因子在所有细胞类型中大多是共享的。睡眠障碍（如呼吸暂停、失眠）扰乱了生物钟的计时，需要重新携带并导致疲劳。生物钟的持续中断是身体压力的来源，也是癌症和心血管疾病的危险因素

WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Circadian Rhythms PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0032-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Aanat

Alas1

Arntl

Arntl2

Bhlhe40

Bhlhe41

Calm1

Calm2

Calm3

Camk2a

Camk2b

Camk2d

B

Camk2g

Cartpt

Ccrn4l

Chrnb2

Clock

Creb1

Creb3

Crx

Cry1

Cry2

Csnk1a1

Csnk1d

C

Csnk1e

Csnk2a1

Csnk2a2

Dbp

Egr1

Egr3

Epo

Esrra

Fbxl21

Fbxl3

Hebp1

Hlf

D

Htr7

Irf1

Kcnma1

Mapk1

Mapk14

Mapk3

Mat2a

Mtnr1a

Mtnr1b

Myod1

Ncoa3

Nfil3

E

Nkx2-5

Nms

Npas2

Nr1d1

Nr1d2

Nr2f6

Opn3

Opn4

Pax4

Per1

Per2

Per3

F

Pou2f1

Ppara

Ppargc1a

Prf1

Prkaca

Prkacb

Prkar1a

Prkar1b

Prkar2a

Prkar2b

Prkca

Prkcb

G

Prokr2

Ptgds

Rora

Rorb

Rorc

Rps6ka1

Rps6ka2

Rps6ka3

Slc9a3

Smad4

Sp1

Srebf1

H

Stat5a

Tef

Tfap2a

Tgfb1

Timeless

Wee1

Actb

Gapdh

Hprt

B2m

NTC

NTC

基因分类（Mouse）	相关基因
生物钟	Arntl ,Arntl2,Bhlhe40,Bhlhe41,Clock,Cry1,Cry2,Csnk1e,Nr1d1,Nr1d2,Per1,Per2,Per3,Rora,Timeless.
酪蛋白激酶	Csnk1a1,Csnk1d,Csnk1e,Csnk2a1,Csnk2a2.
CREB信号	Aanat,Camk2a,Camk2b,Camk2d,Camk2g,Chrnb2,Creb1,Creb3,Htr7,Kcnma1,Mapk1,Mapk14,Mapk3,Mat2a,Prkaca,Prkacb, Prkar1a,Prkar1b,Prkar2a,Prkar2b,Prkca,Prkcb,Prokr2.
光敏蛋白质	褪黑激素受体Mtnr1a,Mtnr1b. 其他光敏蛋白质Chrnb2,Crx.
昼夜节律调节转录因子	Alas1,Dbp,Egr1,Egr3,Epo,Esrra,Hlf,Irf1,Myod1,Nfil3,Nkx2-5,Pax4,Pou2f1,Ppara,Rorb,Rorc,Smad4,Sp1,Srebf1,Stat5a,Tef,Tfap2a,Tgfb1,Wee1
其他常见的昼夜节律调节基因	Cartpt,Fbxl21,Fbxl3,Hebp1,Ncoa3,Nms,Noct,Npas2,Nr2f6,Ppargc1a ,Prf1,Ptgds,Slc9a3

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.