产品介绍：

      DNA损伤是由内源性（胞代谢过程）或者外源性（电离辐射、烷基化剂等因素）引起的。DNA损伤发生时会有多种基因参与DNA修复途径，可以纠正不同类型的DNA损伤。由ATM和ATR激酶协调作用的信号网路是DNA损伤的中央调节器。ATM/ATR 的激活阻滞了细胞周期进程，并通过磷酸化多种底物来启动 DNA 修复。若DNA 损伤无法修复，细胞将走向凋亡，以维持机体正常的生命进程。因此，DNA 损伤可引起细胞周期停滞、细胞凋亡以及影响细胞基因组的稳定和修复。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品名：	DNA Damage Signaling Pathway PCR Array
种属：	Rat
货号：	wc-mRNA0041-R
规格：	96孔板
品牌：	WCGENE ® biotech
产品：	96孔引物预制板，封板膜，说明书
储存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Abl1

Blm

Chek2

Ercc1

Gadd45a

Mlh3

Parp1

Poli

Rad21

Rnf8

Topbp1

Xrcc2

B

Apex1

Brca1

CIB1

Ercc2

Gadd45g

Mpg

Parp2

Ppm1d

Rad50

Rpa1

Tp53

Xrcc6

C

Atm

Brca2

CRY1

Exo1

Hus1

Mre11a

Pcna

Ppp1r15a

Rad51

Sirt1

Tp53bp1

Polh

D

Atr

Cdc25a

Csnk2a2

Fanca

Lig1

Msh2

Pms1

Prkdc

Rad51b

Smc1a

Ung

Rad18

E

Atrx

Cdc25b

Dclre1a

Fancc

Mbd4

Msh3

Pms2

Pttg1

Rad51c

Smc3

Wrn

Rev1

F

Bard1

Cdc25c

DDB1

Fancd2

Mgmt

Nbn

Pold3

Rad1

Rad52

Sumo1

Wrnip1

Terf1

G

Bax

Cdkn1a

Ddb2

Fancg

Mif

Nthl1

Pole

Rad17

Rad9

Sumo2

Xpc

Xrcc1

H

Bbc3

Chek1

Ddit3

Fen1

Mlh1

Ogg1

ACTB

GAPDH

HPRT1

Ubb

NTC

NTC

基因分类（rat）	相关基因
ATM/ATR信号	Atm,Atr,Bard1,Brca1,Cdc25a,Chek1,Chek2,Csnk2a2,Fancd2,Hus1,Parp1 ,Parp2,Rad1,Rad17,Rad50, Rad9,Rnf8,Smc1a,Topbp1,Tp53.
DNA 损伤和修复	Apex1,Atrx,Blm,Brca2,Cib1,Dclre1a,Ddb1,Ddb2,Ercc1,Ercc2 ,Exo1,Fanca,Fancc,Fancg,Fen1,Gadd45a,Gadd45g,Lig1,Mbd4, Mgmt ,Mlh1,Mlh3,Mpg,Mre11a,Msh2,Msh3,Nbn ,Nthl1,Ogg1,Pcna,Pms1,Pms2,Pold3,Pole,Polh,Poli,Pttg1,Rad18,Rad51,Rad51b, Rad51c,Rad52,Rev1,Rpa1,Smc3,Sumo1,Sumo2,Tp53 ,Tp53bp1,Ung,Wrn,Wrnip1,Xpc,Xrcc1,Xrcc2,Xrcc6.
细胞凋亡	Abl1,Bard1,Bax,Bbc3,Brca1,Cdkn1a,Cry1,Chek2,Csnk2a2,Ppp1r15a ,Prkdc,Rad21,Rad9,Sirt1,Terf1,Tp53.
细胞周期	Cdc25a,Cdc25b,Cdc25c,Cdkn1a,Chek1,Chek2,Ddit3,Mif,Ppm1d ,Ppp1r15a ,Terf1,Tp53.

DNA损伤信号通路图

图片来源：https://www.wikipathways.org/index.php/Pathway:WP707#nogo2

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.