产品内容

品    名：	DNA methylation PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	wc-mRNA0364-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

DNA甲基化基因分类：

C-5 methylation of cytosine：Dnmt1,Dnmt3a,Dnmt3b,Dnmt3c,Dnmt3l,Stpg4

chromatin reprogramming in the zygote：Mettl23

DNA demethylation of male pronucleus：Tet3

DNA hypermethylation：Morc1

DNA methylation：Bend3,Bmi1,Ctcf,Ehmt1,Ehmt2,Eomes,Ezh2,Gnas,Gnasas1,Hells,Hymai,Kmt2a,Kmt2e,Mbd4,Meg3,Mta2,Mtrr,Pax6,Ppm1d,Spocd1,Tex15

DNA methylation involved in embryo development：Trim28,Zdbf2,Zfp57

DNA methylation involved in gamete generation：Asz1,Ddx4,Fkbp6,Kdm1b,Mael,Mov10l1,Piwil2,Piwil4,Pld6,Tdrd1,Tdrd5,Tdrd9,Tdrd12

DNA methylation on adenine：Mettl4

DNA methylation on cytosine within a CG sequence：Smarca4

hypermethylation of CpG island：Gsk3a,Gsk3b,Kcnq1ot1

hypomethylation of CpG island：Pik3ca,Zmpste24

positive regulation of DNA methylation：Bmyc,Mecp2,Myc,Wt1

protection of DNA demethylation of female pronucleus：Dppa3

regulation of DNA methylation：,Brca1,Dubr,Ftx,Grhl2,H19,Mis18a,Mphosph8,Parp1,Prdm14,Prmt5,Rlf,Rsl1,Smarca5,Tet1

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Asz1

Atf7ip

Baz2a

Bend3

Bmi1

Bmyc

Brca1

Ctcf

Ddx4

Dnmt1

Dnmt3a

Dnmt3b

B

Dnmt3c

Dnmt3l

Dppa3

Dubr

Ehmt1

Ehmt2

Eomes

Ezh2

Fkbp6

Ftx

Gnas

Gnasas1

C

Grhl2

Gsk3a

Gsk3b

H19

Hells

Hymai

Kcnq1ot1

Kdm1b

Kmt2a

Kmt2e

Mael

Mbd4

D

Mecp2

Meg3

Mettl4

Mettl23

Mis18a

Morc1

Mov10l1

Mphosph8

Mta2

Mtrr

Myc

Parp1

E

Pax6

Pik3ca

Piwil2

Piwil4

Pld6

Ppm1d

Prdm14

Prmt5

Rlf

Rsl1

Smarca4

Smarca5

F

Spocd1

Stpg4

Tdrd1

Tdrd5

Tdrd9

Tdrd12

Tet1

Tet3

Tex15

Trim28

Wt1

Zdbf2

G

Zfp57

Zmpste24

Mgmt

N6amt1

Hemk1

Gatad2a

Atrx

Dmap1

Pick1

Actb

Gapdh

Hprt1

H

Ubb

NTC

NTC

NTC

NTC

NTC

NTC

NTC

NTC

NTC

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.