产品介绍 ：

细胞死亡途径包括细胞凋亡（Apoptosis）、坏死性凋亡（Necroptosis）、自噬（Autophagy）、铁死亡（Ferroptosis）、细胞焦亡（Pyroptosis）、坏死（Necrosis）等方式。沃吉基因死亡筛选PCR阵列通过检测调控不同死亡方式的关键基因，筛选出能够解释细胞现象的机制，为您的研究助力。

WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

细胞死亡途径	形态特征关键	生化途径成分
细胞凋亡	核破裂、质膜起泡、细胞皱缩、凋亡小体的形成和邻近细胞的吞噬作用	促凋亡 BCL-2家族成员、caspase激活、数百种caspase底物（例如ICAD、PARP）的裂解、磷脂酰丝氨酸暴露、ΔΨm耗散、MOMP和ROS 产生。
坏死性凋亡	质膜完整性丧失和细胞质内容物释放、细胞质和细胞器膨胀、染色体凝聚。	RIPK1、RIPK3、MLKL、RIPK1的磷酸化和泛素化、细胞质中坏死小体复合物的形成、MLKL的磷酸化和激活、半胱天冬酶的效应物、活性氧的产生和 DAMP的释放（以及受感染细胞中的PAMP）。
自噬	自噬液泡的积累、细胞质的液泡化、无染色质凝聚。	atg基因编码蛋白家族，LC3-I 到 LC3-II 的转化和 p62 的切割。
铁死亡	较小的线粒体、嵴减少、膜密度增加、线粒体膜破裂、但细胞核正常。	铁积累、半胱氨酸剥夺和/或谷胱甘肽过氧化物酶失活最终导致脂质过氧化。
焦亡	质膜破裂和释放细胞内容物和促炎细胞因子	炎症诱导的启动子 caspase、caspase-1 和 caspase -11 的激活，以及随后的效应子caspase、caspase-3 和caspase -1 的激活。生物活性 IL-1β 和 IL-18 的释放以及 GSDMD（细胞焦亡的基本效应物）的蛋白水解激活。

产品内容

品    名：	Death screening PCR Array
种    属：	Rat
货    号：	wc-mRNA0358-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Abl1

Aim2

Akt1

Apaf1

App

Atg12

Atg16l1

Atg3

Atg5

Atg7

Bax

Bcl2

B

Bcl2a1

Bcl2l1

Bcl2l11

Becn1

Birc2

Birc3

Bmf

Bnip3

Casp1

Casp2

Casp3

Casp6

C

Casp7

Casp9

Cd40

Cd40lg

Cflar

Ctsb

Ctss

Cyld

Defb1

Dennd4a

Dffa

Dpysl4

D

Eif5b

Esr1

Fadd

Fas

Faslg

Foxi1

Galnt5

Gpx4

Grb2

Gsdma

Gsdmc

Gsdmd

E

Gsdme

Gzma

Hmox1

Hspbap1

Ifng

Igf1

Il1b

Il6

Irgm

Jph3

Kcnip1

Lamp1

F

Map1lc3a

Mapk8

Mcl1

Nfkb1

Nlrp1

Nlrp3

Nox2

Nqo1

Parp1

Parp2

Pik3c3

Rab25

G

Ripk1

Ripk3

Rps6kb1

Slc3a2

Slc7a11

Snca

Sqstm1

Tf

Tfr1

Tnf

Tnfrsf11b

Tnfrsf1a

H

Tp53

Tradd

Traf2

Txnl4b

Ulk1

Xiap

Actb

Gapdh

Hprt1

Ubb

NTC

NTC

基因分类（Rat）		相关基因
凋亡	促凋亡	ABL1 , APAF1 , BAX , BCL2L11 , BIRC2 (c-IAP1) , CASP1 (ICE) , CASP3 , CASP6 , CASP7 , CASP9 , CD40 (TNFRSF5) , CD40LG , CFLAR (CASPER) , CYLD , DFFA , FAS , FASLG (TNFSF6)   , TNF ,  TNFRSF1A (TNFR1) , TP53 (p53) TRADD。
	抗凋亡	AKT1 , BCL2 , BCL2A1 (BFL1) , BCL2L1 (BCLXL) , BIRC3 (c-IAP2) , CASP2 , MCL1 , TNFRSF11B (OPG) , TRAF2 , XIAP
自噬		AKT1 , APP , ATG12 , ATG16L1 , ATG3 , ATG5 , ATG7 , BAX , BCL2 , BCL2L1 (BCLXL) , BECN1 , CASP3 , CTSB , CTSS , ESR1 (ERα) , FAS  , IFNG , IGF1 , IRGM , MAP1LC3A , MAPK8 (JNK1) , NFKB1 , PIK3C3 (VPS34) , RPS6KB1 , SNCA , SQSTM1 , TNF , TP53 (p53) , ULK1。
细胞坏死		BMF , CYLD , DEFB1 , DENND4A , DPYSL4 , EIF5B , FOXI1 , GALNT5, GRB2, HSPBAP1, JPH3, KCNIP1, PARP1 (ADPRT1) , PARP2 , RAB25, TNFRSF1A (TNFR1) , TXNL4B。
细胞焦亡		GSDMA,GSDMC,GSDMD,GSDME,IL1b,IL6.AIM2,NLRP1,NLRP3，GZMA。
铁死亡		GPX4,TF,TFR1,NOX2,HMOX1,NQO1,SLC3A2,SLC7A11
坏死性凋亡		TNF,TNFR1,FADD,RIPK3,RIPK1。

死亡筛选信号通路图：

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.