产品介绍：

   I型糖尿病是一种由自身免疫破坏产生胰岛素的β细胞引起的疾病。某些β细胞蛋白在被抗原呈递细胞（APC）（如巨噬细胞和树突细胞）处理后作为自身抗原，并与APC表面的MHC-II分子形成复合物。然后来自APC的免疫原性信号激活CD4+T细胞，主要是Th1亚群。抗原激活的Th1细胞产生IL-2和IFNgamma。它们激活巨噬细胞和细胞毒性CD8+T细胞，这些效应细胞可以通过两种机制中的一种或两种杀死胰岛β细胞：（1）抗原特异性细胞毒性T细胞与β细胞上的β细胞自身抗原-MHC-I复合物的直接相互作用，以及（2）非特异性炎症介质，如自由基/氧化剂和细胞因子（IL-1、TNF-α、TNF-β、IFNgamma）。I型糖尿病是一种多基因疾病。决定糖尿病发病率的主要遗传因素之一是突变MHC-II等位基因的遗传。另一个可能的候选基因是胰岛素基因。

     糖尿病PCR阵列分析了与糖尿病相关的基因的表达，它们包括导致肥胖、胰岛素抵抗、糖尿病早期发病和糖尿病并发症的基因。这些基因分为六个功能类别：受体、转运蛋白和通道；核受体；代谢酶；分泌因子；信号转导蛋白；和转录因子。包括的许多基因具有组织特异性或组织偏向性表达模式，这也可能受到不同病理生理状态的影响。该阵列可用于研究肥胖和糖尿病模型，筛选治疗方法及其靶点，并描述各种流行病学和环境因素对各种组织或细胞系中基因表达的影响。

     WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Diabetes PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0039-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

RAT

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Ace

Arglu1

Ceacam1

Foxg1

Gsk3b

Ikbkb

Irs2

Nsf

Ptpn1

Snap23

Tgfb1

Vapa

B

Acly

Arhgef3

Cebpa

Foxp3

Hmox1

Il10

Mapk14

Parp1

Pygl

Snap25

Tnf

Vegfa

C

Adra1a

Arl3

Ctla4

G6pc

Hnf1b

Il12b

Mapk8

Pdx1

Rab4a

Sod2

Tnfrsf1a

Nrf1

D

Adrb3

Atf2

Dpp4

Gcg

Hnf4a

Il4r

Neurod1

Pik3cd

Retn

Srebf1

Tnfrsf1b

Ppargc1a

E

Agt

Atp1b3

Dusp4

Gcgr

Icam1

Il6

Nfkb1

Pik3r1

Sell

Stx4

Trib3

Slc2a4

F

Akt2

Ccl5

Enpp1

Gck

Ide

Inppl1

Nkx2-1

Ppara

Serpine1

Stxbp1

Ucp2

Stxbp4

G

Aqp2

Ccr2

Fbp1

Glp1r

Ifng

Ins1

Nos3

Pparg

Slc14a2

Stxbp2

Vamp2

Vamp3

H

Arf4

Cd28

Foxc2

Gpd1

Igfbp5

Irs1

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Rat）	相关基因
受体、运输体和通道	Adra1a,Adrb3,Aqp2,Ccr2,Cd28,Ceacam1,Ctla4,Gcgr,Glp1r,Icam1,Il4r,Nsf,Rab4a,Sell,Slc14a2,Slc2a4, Snap23,Snap25,Stx4,Stxbp1,Stxbp2,Stxbp4,Tnfrsf1a ,Tnfrsf1b,Vamp2,Vamp3,Vapa.
核受体	Ppara,Pparg
代谢酶	Ace,Acly,Dpp4,Enpp1,Fbp1,G6pc,Gck,Gpd1,Gsk3b,Hmox1,Ide,Nos3,Parp1,Pygl,Sod2.
细胞因子和生长因子	Agt,Ccl5,Gcg,Ifng,Il10,Il12b,Il6,Ins1,Retn,Tgfb1,Tnf,Vegfa
信号转导	Akt2,Dusp4,Igfbp5,Ikbkb,Inppl1,Irs1,Irs2,Mapk14,Mapk8,Pik3cd,Pik3r1,Ptpn1,Trib3
转录因子	Cebpa,Foxc2,Foxg1,Foxp3,Hnf1b,Hnf4a,Neurod1,Nfkb1,Nkx2-1,Nrf1,Pdx1,Ppargc1a,Srebf1.
其他糖尿病基因	Serpine1,Ucp2.

糖尿病通路图：

图片来源于：https://www.kegg.jp/kegg-bin/show_pathway?map04940

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.