产品介绍

      扩张型心肌病（DCM）是一种心肌疾病，其特征是左心室或双心室扩张和收缩受损，导致进行性心力衰竭和室性心律失常导致的心源性猝死。遗传性扩张型心肌病（“家族性”扩张型心肌病）已在25-35%的患者中发现，遗传性基因缺陷是“家族性的”扩张型扩张型心肌病的重要原因。病理生理学可分为两类：力产生缺陷和力传递缺陷。在无法确定潜在病理的情况下，患者被诊断为“特发性”扩张型心肌病。目前关于“特发性”扩张型心肌病病因的假设主要集中在肠道病毒诱导的心肌炎和随后的自身免疫性心肌损伤。在大量“特发性”扩张型心肌病患者中检测到的β1肾上腺素能受体（β1AR）抗体可能会增加细胞内cAMP和细胞内Ca2+的浓度，这种情况通常会导致短暂的心脏功能亢进，随后出现心功能下降和心力衰竭。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Dilated cardiomyopathy PCR Array
种    属：	HUMAN
货    号：	wc-mRNA0215-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

HUMAN

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ACTC1

ADCY8

CACNA1D

CACNB3

CACNG8

ITGA10

ITGA7

ITGB6

MYL2

SGCB

TGFB3

TPM4

B

ACTG1

ADCY9

CACNA1F

CACNB4

DAG1

ITGA11

ITGA8

ITGB7

MYL3

SGCD

TNF

TTN

C

ADCY1

ADRB1

CACNA1S

CACNG1

DES

ITGA2

ITGA9

ITGB8

PLN

SGCG

TNNC1

ITGB5

D

ADCY2

AGT

CACNA2D1

CACNG2

DMD

ITGA2B

ITGAV

LAMA2

PRKACA

SLC8A1

TNNI3

MYH7

E

ADCY3

ATP2A1

CACNA2D2

CACNG3

EMD

ITGA3

ITGB1

LMNA

PRKACB

SLC8A2

TNNT2

SGCA

F

ADCY5

ATP2A2

CACNA2D3

CACNG4

GNAS

ITGA4

ITGB3

MYBPC3

PRKACG

SLC8A3

TPM1

TGFB2

G

ADCY6

ATP2A3

CACNB1

CACNG5

IGF1

ITGA5

ITGB4

MYH6

RYR2

TGFB1

TPM2

TPM3

H

ADCY7

CACNA1C

CACNB2

CACNG7

ITGA1

ITGA6

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

NTC

NTC

扩张型心肌病通路图：

图片来源于：https://www.kegg.jp/kegg-bin/show_pathway?map05414

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.