产品内容

品    名：	Drug Metabolism PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0043-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ABCB1

ALAD

ASNA1

CYB5R3

CYP2C9

CYP8B1

GAD1

GPX5

GSTT1

MGST2

NOS3

SRD5A1

B

ABCC1

ALDH1A1

BLVRA

CYP11B2

CYP2D6

DHRS2

GAD2

GSR

GSTZ1

MGST3

NQO1

SRD5A2

C

ADH1B

ALOX12

BLVRB

CYP17A1

CYP2E1

DPYD

GCKR

GSTA3

HK2

MPO

PKLR

GPX4

D

ADH1C

ALOX15

CES1

CYP19A1

CYP2F1

EPHX1

GPI

GSTA4

HSD17B1

MT2A

PKM

GSTP1

E

ADH4

ALOX5

CES2

CYP1A1

CYP2J2

ESD

GPX1

GSTM2

HSD17B2

MT3

PON1

MGST1

F

ADH5

AOC1

CES3

CYP2B6

CYP3A4

FAAH

GPX2

GSTM3

HSD17B3

MTHFR

PON2

NAT2

G

ADH6

APOE

CHST1

CYP2C19

CYP3A5

FBP1

GPX3

GSTM5

LPO

NAT1

PON3

SNN

H

AHR

ARNT

COMT

CYP2C8

CYP7B1

FMO1

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（human）			相关基因
DrugTransporters	Metallothioneins		MT2A,MT3
	P-GlycoproteinFamily Members		ABCB1 (MDR1, PGY1),ABCC1 (MRP1),GPI.
PhaseI Metabolizing Enzymes			CYP11B2,CYP17A1,CYP19A1,CYP1A1,CYP2B6,CYP2C19,CYP2C8,CYP2C9,CYP2D6,CYP2E1,CYP2F1,CYP2J2,CYP3A4,CYP3A5.
PhaseIIMetabolizing Enzymes		Carboxylesterases	CES1,CES2,CES3.
		Decarboxylases	GAD1,GAD2.
		Dehydrogenases	ADH1B,ADH1C,ADH4,ADH5,ADH6,ALAD,ALDH1A1(RALDH1),HSD17B1,HSD17B2,HSD17B3.
		Glutathione Peroxidases	(GPx)GPX1,GPX2,GPX3,GPX4,GPX5,GSTA3,GSTA4,GSTM2,GSTM3,GSTM5,GSTP1,GSTT1,GSTZ1,LPO,MPO.
		Lipoxygenases	ALOX12,ALOX15,ALOX5,APOE.
		Hydrolases	ASNA1,EPHX1,FAAH,FBP1.
		Kinases	HK2,PKLR,PKM.
		Oxidoreductases	AOC1,BLVRA,BLVRB,CYB5R3,GPX1,GPX2,GSR,MTHFR,NOS3 (eNOS),NQO1,SRD5A1,SRD5A2.
		Paraoxonases	PON1,PON2,PON3.
		Glutathione S-Transferases	GSTA3,GSTA4,GSTM2,GSTM3,GSTM5,GSTP1,GSTT1,MGST1,MGST2,MGST3.
		OtherPhaseIIMetabolizingEnzymes	CHST1,COMT,NAT1,NAT2.
Other Drug Metabolism Genes			AHR,ARNT,GCKR,SNN.

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.