产品介绍

      受体酪氨酸激酶（RTKs）的ErbB家族将细胞外生长因子配体与细胞内信号通路的结合偶联，这些信号通路调节不同的生物反应，包括增殖、分化、细胞运动和存活。与该RTK家族的四个密切相关成员——表皮生长因子受体（EGFR，也称为ErbB-1或HER1）、ErbB-2（HER2）、Erb B-3（HER3）和Erb B-4（HER4）——结合的配体诱导受体同源和异源二聚体的形成以及内在激酶结构域的激活，导致细胞质尾部内特定酪氨酸残基（pY）的磷酸化。含有含有pY的肽的结合口袋的信号效应物被募集到活化的受体并诱导各种信号通路。Shc-和/或Grb2活化的丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）途径是所有ErbB受体下游的共同靶点。类似地，磷脂酰肌醇-3-激酶（PI-3K）途径被大多数ErbBs直接或间接激活。一些细胞质对接蛋白似乎被特定的ErbB受体募集，而较少被其他受体利用。这些包括衔接子Crk、Nck、磷脂酶Cγ（PLCgamma）、细胞内酪氨酸激酶Src或Cbl E3泛素蛋白连接酶。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	ERBB Signaling PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0227-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ABL1

BCL2L11

CBL

EGF

fak

HRAS

MAP2K7

NCK2

PAK3

PRKCA

RPS6KB2

TGFA

B

AKT1

BIRC5

CBLB

EGFR

FOXA1

IGF1R

MAPK10

NRAS

PAK4

PRKCB

SHC1

TP53

C

AKT2

BRAF

CCND1

EIF4EBP1

FOXO1

jnk

MAPK8

NRG1

PAK6

PRKCG

SHC2

NCK1

D

AKT3

BTC

CDKN1A

ELK1

GAB1

JUN

MAPK9

NRG2

PDK1

PTEN

SOS1

PAK2

E

ARAF

CAMK2A

CDKN1B

ERBB2

GRB2

KRAS

MDM2

NRG3

PIK3CA

PTK2

SOS2

PLCG2

F

AREG

CAMK2B

CRK

ERBB3

GSK3A

MAP2K1

MTOR

NRG4

PIK3CB

PTPN21

SRC

RPS6KB1

G

BAD

CAMK2D

CRKL

ERBB4

GSK3B

MAP2K2

MYC

PAK1

PLCG1

RAF1

STAT5A

STAT5B

H

BCL2

CAMK2G

E2F2

EREG

HIF1A

MAP2K4

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

ERBB信号通路图：

图片来源于：https://www.genome.jp/kegg-bin/show_pathway?map04012

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.