产品介绍

       红细胞生成是多能干细胞产生成熟终末期细胞的主要途径之一。Epo（促红细胞生成素）是一种谱系特异性造血细胞，是定向红系祖细胞生存、增殖和分化所必需的。其主要作用是促进红系分化和启动血红蛋白合成。因此，Epo已被确定为红细胞生成所需的主要激素。Epo通过EpoR（Epo受体）发挥其功能，EpoR是I类细胞因子受体家族的成员。Epo与其受体结合后，受体形成同源二聚体，并通过与酪氨酸激酶JAK2（Janus激酶-2）物理缔合和相互作用而进行磷酸化。一旦磷酸化，这些酪氨酸残基允许募集和激活许多下游衔接子和效应子，包括：STAT5（转录因子-5的信号转导和激活子）、PI3K（磷脂酰肌醇-3激酶）、酪氨酸磷酸酶SHP1、ERKs（细胞外信号调节激酶）、JNK（Jun N-末端激酶），和p38 MAPK（有丝分裂原活化蛋白激酶）。STAT5作为一种转录因子，与细胞核DNA结合，将信号从膜传递到细胞核。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况

产品内容

品    名：	ERYTHROPOIETIN PATHWAY PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0173-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

CSNK2A1

JAK2

MAP2K6

MAPK4

NFKBIA

PIK3C3

PIK3R5

PPP1R14A

PPP2CA

PPP2R4

RELA

SOS2

B

CSNK2A2

JUN

MAPK1

MAPK6

NFKBIB

PIK3CA

PLCG1

PPP1R15A

PPP2CB

PPP2R5A

RELB

STAT5B

C

CSNK2B

KRAS

MAPK10

MAPK7

NFKBIE

PIK3CB

PLCG2

PPP1R1B

PPP2R1A

PPP2R5B

RRAS

PPP1R13B

D

EPO

MAP2K1

MAPK11

MAPK8

NRAS

PIK3CD

PPP1R10

PPP1R2

PPP2R1B

PPP2R5C

RRAS2

PPP1R9B

E

EPOR

MAP2K2

MAPK12

MAPK9

PDPK1

PIK3R1

PPP1R11

PPP1R3A

PPP2R2A

PPP2R5E

SHC1

PPP2R3A

F

FOS

MAP2K3

MAPK13

MRAS

PIK3C2A

PIK3R2

PPP1R12A

PPP1R3C

PPP2R2B

PTPN6

SHC2

REL

G

GRB2

MAP2K4

MAPK14

NFKB1

PIK3C2B

PIK3R3

PPP1R12B

PPP1R8

PPP2R2C

RAF1

SHC3

SOS1

H

HRAS

MAP2K5

MAPK3

NFKB2

PIK3C2G

PIK3R4

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.