产品介绍：

      非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是肝脏中储存过多脂肪的病症。非酒精性脂肪性肝炎（NASH）是一种以肝脏炎症为特征的NAFLD，可能会发展为瘢痕形成和不可逆转的损伤，类似于重度饮酒引起的损伤。葡萄糖代谢，胰岛素信号传导，炎症，氧化应激，ER-sgtress和细胞凋亡的组分都参与并且在该疾病的进展中相互关联。

      胰岛素抵抗是非胰岛素依赖型糖尿病（NIDDM）或2型糖尿病的主要症状。在食物消耗期间，胰岛素释放激活胰岛素信号传导和细胞摄取葡萄糖，导致碳水化合物和脂质的合成和储存。由于残留的血糖，包括NIDDM的发展，胰岛素抵抗的个体易受多种病理生理学的影响。患有NIDDM的个体通常肥胖，并且许多具有额外的相关病症（即心血管疾病），统称为代谢综合征。肥胖上调脂肪组织中脂肪因子的分泌，激活肝脏脂肪因子信号，同时抑制肝脏胰岛素信号传导。这两种信号传导途径控制碳水化合物和脂质代谢所必需的许多酶和转运蛋白的表达。此外，在NAFLD和胰岛素抵抗期间，肝脏氧化磷酸化常常被破坏。该阵列包括涉及脂肪因子和胰岛素信号传导的肝基因，代谢酶和转运蛋白，通常在NIDDM中失调的基因，以及涉及炎症和细胞凋亡的基因。

      沃吉基因脂肪肝PCR阵列可以深入了解肝脏中胰岛素抵抗和代谢失调的机制轻松可靠地分析参与NAFLD机制的一组重点基因的表达

       WCGENE®PCRArrayPlate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Fatty Liver PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0055-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Abca1

Abcg1

Acaca

Acadl

Acly

Acox1

Acsl3

Acsl4

Acsl5

Acsm3

Adipor1

Adipor2

B

Akt1

Apoa1

Apob

Apoc3

Apoe

Atp5c1

Casp3

Cat

Cbs

Cd14

Cd36

Cebpb

C

Cnbp

Cpt1a

Cpt2

Cyp2e1

Cyp7a1

Dgat2

Fabp1

Fabp3

Fabp4

Fabp5

Fas

Fasn

D

Foxa2

G6pc1

G6pd

Gck

Gk

Gsk3b

Hmgcr

Hnf4a

Ifng

Igf1

Igfbp1

Il10

E

Il1b

Il6

Insr

Irs1

Ldlr

Lepr

Lpl

Mapk1

Mapk8

Mlxipl

Mtor

Ndufb6

F

Nfkb1

Nr1h2

Nr1h3

Nr1h4

Pck2

Pdk4

Pik3ca

Pik3r1

Pklr

Ppa1

Ppara

Ppard

G

Pparg

Ppargc1a

Prkaa1

Ptpn1

Rbp4

Rxra

Scd1

Serpine1

Slc27a5

Slc2a1

Slc2a2

Slc2a4

H

Socs3

Srebf1

Srebf2

Stat3

Tnf

Xbp1

Actb

Gapdh

Hprt1

Ubb

NTC

NTC

基因分类（Rat）	相关基因
胰岛素信号	Akt1,Foxa2,Gsk3b,Igf1,Igfbp1,Insr,Irs1,Mapk1,Mapk8,Mtor,Pik3ca,Pik3r1,Pklr,Ppargc1a,Prkaa1 ,Ptpn1,Slc2a4,Socs3,Srebf1
脂肪因子信号	Adipor1,Adipor2,Akt1,Cd36 ,Irs1,Lepr,Mapk8,Mtor,Nfkb1,Ppara,Ppargc1a,Prkaa1,Rxra,Serpine1,Slc2a1,Slc2a4,Socs3,Stat3,Tnf
非胰岛素依赖型糖尿病	Gck,Insr,Irs1,Mapk1 ,Mapk8,Mtor,Pik3ca,Pik3r1,Pklr,Slc2a2,Socs3,Tnf,Xbp1
碳水化合物代谢	Acly,G6pc,G6pd,Gck,Gsk3b,Mlxipl ,Pck2,Pdk4,Pklr,Rbp4
β氧化	Acadl,Acox1,Akt1,Cpt1a,Cpt2,Fabp1,Irs1,Mtor,Ppara
胆固醇代谢与转运	Abca1,Abcg1,Apoa1,Apob,Apoc3,Apoe,Cd36 ,Cnbp,Cyp2e1,Cyp7a1,Hmgcr,Ldlr,Lepr,Nr1h2,Nr1h3,Nr1h4,Ppara,Ppard,Pparg,Prkaa1 ,Rxra,Srebf1,Srebf2
其他脂质代谢和转运基因	Acaca,Acsl5,Acsm3,Dgat2,Fabp3,Fabp5,Fasn,Gk,Hnf4a,Lpl,Ppa1,Scd,Slc27a5
氧化磷酸化	Atp5c1,Ndufb6,Ppa1
炎症反应	Cebpb,Fas,Ifng,Il10,Il1b,Il6,Nfkb1,Rxra,Tnf
凋亡	Akt1,Casp3,Cebpb,Fas,Mapk1 ,Mapk8,Nfkb1,Pik3ca,Pparg,Prkaa1 ,Rxra,Serpine1,Socs3,Tnf

脂肪肝通路图：

图片来源：https://www.wikipathways.org/index.php/Pathway:WP4396

 

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.