产品介绍：

      铁死亡是最近研究热门的一种受调节的细胞死亡形式。当细胞发生铁死亡时会存在比正常线粒体更小的线粒体膜密度浓缩、线粒体嵴减少或消失以及线粒体外膜破裂。

      参与铁死亡过程包括线粒体电压依赖性阴离子通道和丝裂原活化蛋白激酶的激活、内质网应激的上调和胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白的抑制。该过程的特点是脂质过氧化产物和来自铁代谢的致死活性氧 (ROS) 的积累，并且可以通过铁螯合剂和脂质过氧化抑制剂。GPX4、HSPB1和NRF2分别通过限制 ROS 产生和减少细胞铁摄取来作为铁死亡的负调节因子。相比之下，NOX和 P53分别通过促进 ROS 产生和抑制 SLC7A11的表达而作为铁死亡的正调节剂。铁死亡调节异常与多种生理和病理过程有关，包括癌细胞死亡、神经毒性、神经退行性疾病、急性肾功能衰竭、药物诱导的肝毒性、肝和心脏缺血/再灌注损伤和 T 细胞免疫。

      沃吉基因细胞铁死亡PCR阵列包括铁离子，线粒体功能调节，GSH稳态调节和氧化还原等关键90个基因。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品名：	Ferroptosis PCR Array
种属：	Human
货号：	wc-mRNA0271-H
规格：	96孔板
品牌：	WCGENE ® biotech
产品：	96孔引物预制板，封板膜，说明书
储存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

                      

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ACO1

ATG5

CDO1

DPP4

GCLM

HARS

IREB2

NCOA4

PCBP1

SAT2

STEAP3

VDAC2

B

ACSL4

ATP5G3

CHAC1

ELAVL1

GLS2

HEPH

KEAP1

NFE2L2

PCBP2

SLC1A5

STIM1

VDAC3

C

AKR1B1

BBC3

CISD1

EMC2

GOT1

HFE

KRAS

NOX1

PPARG

SLC39A14

TF

MAP1LC3C

D

AKR1B10

BECN1

CISD2

EPRS

GPX4

HMOX1

LOX

NOX3

PRDX6

SLC39A8

TFR1

PANX2

E

AKR1C1

BRAF

CP

FTH1

GSS

HMOX2

LPCAT3

NOX4

PRNP

SLC3A2

TFR2

SAT1

F

ALDH1A1

BRD4

CS

FTL

GSTA1

HRAS

MAP1LC3A

NQO1

PTGES2

SLC40A1

TP53

SQSTM1

G

ALOX15

CA9

CYBB

FTMT

GSTP1

HSF1

MAP1LC3B

NRAS

RPL8

SLC7A11

TXNRD1

USP7

H

ATF4

CARS1

DMT1

GCLC

HAMP

HSPB1

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

NTC

NTC

基因分类（Human）	相关基因
铁离子相关基因：	STEAP3,SLC39A14,HAMP,CP,TFR2,PCBP1,PCBP2,ACO1,IREB2,NCOA4.
线粒体功能调节：	VDAC2,VDAC3.
GSH稳态调节：	CHAC1,SLC7A11,SAT1,SLC1A5,GCLM,GLS2,GCLC,GOT1,CARS,BECN1.
氧化还原调节：	CISD1,NOX4,HMOX1,NQO1,CYBB,DPP4,NOX1.

细胞铁死亡通路图

图片来源于：https://www.genome.jp/pathway/map04216

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。
    WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，严格按照所用试剂盒说明书操作，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无降解，A260/A280比值应为1.8-2.0；浓度50ng以上
cDNA：	500 ng逆转，10倍稀释
内参范围：	GAPDH值：细胞20以内；组织22以内

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液900μl，混匀后，将配好的混合液按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，再次进行离心，随后上机。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	单孔（9μl）	96孔（900μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	5 μl	500 μl
cDNA sample	1 μl	100 μl
无RNA酶ddH2O	2.8 μl	280 μl
ROX Reference Dye（50×） （由具体机器型号而定）	0.2 μl	20 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

注意事项

1. 在尝试操作之前，请仔细阅读说明书。

2. 使用前，将铝箔密封包装袋打开，随即将板子离心，请勿撕开板子上层封板膜。

3. 严格执行qPCR标准程序，避免核酸污染和非特异性扩增。

4. 需自备设备：96孔qpcr仪，96孔板离心机

 

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.