产品内容

品    名：	Ferroptosis PCR Array plate
种    属：	Zebrafish
货    号：	WC-MRNA0271-zebrafish
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

zebrafish

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

aco1

braf

cp

fth1

hars

kras

nox4

rpl8

steap3

vdac3

atg13

gsh

B

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cs

gclc

heph

lox

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sat2

stim1

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C

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cybb

gclm

hmox1

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D

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E

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got1

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vdac2

F

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chac1

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gss

hspb1

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slc3a2

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usp7

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G

bbc3

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emc2

gstp1

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nfe2l2

prnp

slc40a1

txnrd1

cbsb

ipp

atg7

H

becn1

cisd2

eprs

hamp

keap1

nox1

actin

tuba1b

eef1a1

gapdh

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，严格按照所用试剂盒说明书操作，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无降解，A260/A280比值应为1.8-2.0；浓度50ng以上
cDNA：	500 ng逆转，10倍稀释
内参范围：	GAPDH值：细胞20以内；组织22以内

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液900μl，混匀后，将配好的混合液按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，再次进行离心，随后上机。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	单孔（9μl）	96孔（900μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	5 μl	500 μl
cDNA sample	1 μl	100 μl
无RNA酶ddH2O	2.8 μl	280 μl
ROX Reference Dye（50×） （由具体机器型号而定）	0.2 μl	20 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

注意事项

1. 在尝试操作之前，请仔细阅读说明书。

2. 使用前，将铝箔密封包装袋打开，随即将板子离心，请勿撕开板子上层封板膜。

3. 严格执行qPCR标准程序，避免核酸污染和非特异性扩增。

4. 需自备设备：96孔qpcr仪，96孔板离心机

 

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.