产品介绍：

局灶性粘连和半桥粒形成于与ECM成分结合的整合素胞内结构域周围，如上皮细胞基底层中的整合素。局灶性粘连将整合素的胞内结构域连接到肌动蛋白丝，而半桥粒将它们连接到基于角蛋白的中间丝。这些结构调节几个关键的正常生物过程，锚定依赖性细胞存活、细胞周期、细胞迁移和伤口愈合。局部粘附功能和完整性的失调在疾病的病理生理学中起着关键作用，如肿瘤转移过程中的纤维化和上皮间质转化。广泛研究的粘着斑激酶PTK2（一种胞浆酪氨酸激酶）和整合素连接激酶（ILK）介导PI-3-激酶/AKT和G蛋白整合素依赖性信号传导，与粘着斑激酶依赖性过程相关。来自局灶性粘连和小窝以及局灶性粘附相互作用蛋白（如丝蛋白、长春蛋白和talin）的下游信号，然后调节肌动蛋白丝的生物发生、组织、聚合和解聚。分析局部粘附和半桥粒组分的表达可能导致更好地理解细胞ECM接触介导的细胞生物学背后的分子机制。使用实时PCR，研究研究可以轻松可靠地分析与该阵列的局灶性粘连相关的一组聚焦基因的表达。

WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Focal Adhesions PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0061-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ACTN1

CAPN2

DIAPH1

HRAS

ITGA5

ITGAX

MAP2K1

PAK4

PRKCB

RAP1A

SOS1

VCL

B

ACTN2

CAV1

DOCK1

ILK

ITGA6

ITGB1

MAP2K2

PARVA

PRKCG

RAP1B

SOS2

ZYX

C

ACTN4

CAV2

DST

ITGA1

ITGA7

ITGB2

MAP2K3

PARVB

PTEN

RAPGEF1

SRC

PAK3

D

AKT1

CAV3

FLNA

ITGA11

ITGA8

ITGB3

MAP2K5

PARVG

PTK2

RASGRF1

TLN1

PRKCA

E

AKT2

CDC42

FLNB

ITGA2

ITGA9

ITGB4

MAP2K6

PDPK1

PXN

RHOA

TNS1

RAF1

F

AKT3

CRK

FYN

ITGA2B

ITGAL

ITGB5

PAK1

PIP5K1C

RAC1

ROCK1

VASP

SHC1

G

ARHGAP5

CRKL

GRB2

ITGA3

ITGAM

ITGB6

PAK2

PLEC

RAC2

ROCK2

VAV1

VAV2

H

BCAR1

CTNNB1

GSK3B

ITGA4

ITGAV

JUN

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Human）	相关基因
整合素家族	ITGA1,ITGA11,ITGA2,ITGA2B,ITGA3,ITGA4,ITGA5,ITGA6,ITGA7,ITGA8,ITGA9,ITGAL,ITGAM,ITGAV,ITGAX,ITGB1,ITGB2,ITGB3,ITGB4,ITGB5,ITGB6.
粘着斑激酶信号传导	BCAR1,CAPN2,GRB2,PRKCA,PRKCB,PRKCG,PTEN,PTK2,SHC1,SRC.
整合素连接激酶信号	ACTN1,ACTN2,ACTN4,AKT1,AKT2,AKT3,FLNA,FLNB,ILK,PARVA,PARVB,PARVG,PRKCA,PRKCB,PRKCG,TLN1,VASP,VCL,ZYX.
G蛋白信号	ARHGAP5,CDC42,CRK,CRKL,DOCK1,FYN,GRB2,HRAS,PAK1,PAK2,PAK3,PAK4,RAC1,RAC2,RAF1,RAP1A,RAP1B,RAPGEF1, RASGRF1,RHOA,ROCK1,ROCK2,SHC1,SOS1,SOS2,VAV1,VAV2.
细胞质膜微囊蛋白	CAV1,CAV2,CAV3.
AKT和PI3激酶信号传导	AKT1,AKT2,AKT3,CTNNB1,DOCK1,GSK3B,PDPK1,PIP5K1C,PTEN,VAV1,VAV2.
细胞骨架调节剂	ACTN1,ACTN2,ACTN4,DST,PLEC,PXN,TLN1,TNS1,VASP,VCL,ZYX.
肌动蛋白结合蛋白	ACTN1,ACTN2,ACTN4,DIAPH1,FLNA,FLNB,PARVA,PARVB,PARVG.

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.