产品介绍：

       一系列分子信号，通过激活受体促进相关异源三聚体G蛋白复合物α亚单位上GDP与GTP的交换。然后，GTP结合的活化α-G蛋白与β和γ亚单位分离，以进一步在细胞内传输信号。该途径始于受体-配体相互作用，或对于基础GPCR信号，该途径始于受体在没有激动剂的情况下激活其G蛋白，并以调节下游细胞过程（例如转录）结束。该途径可以从质膜、高尔基体或核膜开始。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品  名：	G-Protein-Coupled Receptor Signaling PathwayFinder PCR Array plate
种  属：	Mouse
货  号：	wc-mRNA0068-M
规  格：	96孔板
品  牌：	Wcgene® biotech
产  品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储  存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Adcy5

Agtrap

Calcrl

Cdkn1b

Drd2

Gcgr

ICAM1

Lhcgr

OPRK1

S1pr1

UCP1

DRD1A

B

Adora2a

Akt1

Casr

Cflar

Dusp14

Gnaq

IL1B

Lpar1

Pdpk1

S1pr2

VCAM1

GALR2

C

Adrb1

Arrb1

Ccl2

Col1a1

Edn1

Gnas

IL1R1

Lpar2

PIK3CG

S1pr3

VEGFA

GRM7

D

Adrb2

Arrb2

Ccl4

Crhr1

Egr1

GRM1

IL1R2

MAX

Prkca

Sctr

YWHAZ

KCNH8

E

Agt

Bai1

Ccnd1

Crhr2

Elk4

GRM2

IL2

Mmp9

Ptgdr

Serpine1

AGTR2

OPRD1

F

Agtr1a

Bcl2

Ccne1

Ctgf

Fgf2

GRM4

JUN

Myc

Ptgs2

Socs1

CALCR

Rho

G

Agtr1b

Bcl2l1

Ccne2

Cyp19a1

Fos

Grm5

JUNB

Nos2

RGS2

Tnf

CDKN1A

Tshr

H

gnai1

gnai2

gnai3

GNB1

GNB2

GALR3

ACTB

GAPDH

HPRT1

B2M

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.