产品介绍：

缝隙连接由结合蛋白和连接蛋白的复合物组成，其胞外结构域与相邻细胞中的类似复合物二聚。这些细胞间复合物形成通道，每个通道都有自己的电导和分子渗透性。这些通道连接细胞质，允许离子和小分子通过并介导相邻细胞之间的通信。神经递质、细胞因子、生长因子和溶血磷脂酸的细胞表面受体激活蛋白激酶、G蛋白和二级信使信号通路，通过连接蛋白磷酸化和膜电位的变化调节缝隙连接。连接蛋白直接结合微管蛋白，其下游信号通路调节和募集微管，以帮助定义细胞形状和介导细胞内运输。连接蛋白直接结合微管蛋白，其下游信号通路调节和募集微管，以帮助定义细胞形状和介导细胞内运输。多种细胞类型表达缝隙连接，包括心肌细胞、角质细胞、星形胶质细胞、内皮细胞和平滑肌细胞。缝隙连接调节许多生物学过程，如细胞生长和分化、胚胎发育、可兴奋细胞收缩、免疫反应、神经活动、组织稳态和代谢转运。连接蛋白基因突变或缝隙连接功能的其他破坏有助于心血管疾病、神经疾病和发育异常的病理生理学。

WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。



产品内容

品    名：	Gap Junctions PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0059-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ADCY1

DBN1

GJB1

GJC3

HRAS

MAP2K5

PANX2

PLCG2

PRKG1

TJAP1

TUBAL3

TUBB7P

B

ADCY2

EGFR

GJB2

GJD2

HTR2A

MAP3K2

PANX3

PPP3CA

PRKG2

TJP1

TUBB

TUBB8

C

ADCY3

GJA1

GJB3

GNAI1

ITPR1

MAPK1

PDGFRA

PRKACA

RAF1

TJP2

TUBB1

PLCG1

D

ADRB2

GJA3

GJB4

GRB2

ITPR2

MAPK3

PDGFRB

PRKACB

SOS1

TUBA1C

TUBB2A

PRKCG

E

CAV1

GJA4

GJB5

GRM1

KRAS

MAPK7

PLCB1

PRKACG

SOS2

TUBA3C

TUBB2B

SRC

F

CDK1

GJA5

GJB6

GUCY1A2

LPAR1

NOV

PLCB2

PRKCA

SP1

TUBA4A

TUBB3

TUBA8

G

CSNK1D

GJA8

GJB7

GUCY1A3

MAP2K1

NRAS

PLCE1

PRKCB

SP3

TUBA4B

TUBB4A

TUBB4B

H

CTNNB1

GJA9

GJC2

GUCY1B3

MAP2K2

PANX1

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Human）	相关基因
缝隙连接蛋白	GJA1 ,GJA3,GJA4,GJA5,GJA8,GJA9,GJB1,GJB2 ,GJB3,GJB4,GJB5,GJB6,GJB7,GJC2,GJC3,GJD2.PANX1,PANX2,PANX3.
细胞表面受体	ADRB2,CAV1,EGFR,GRM1,HTR2A,LPAR1,PDGFRA,PDGFRB.
连接蛋白相互作用蛋白	CAV1,CCN3,CTNNB1,DBN1,TJAP1,TJP1,TJP2.
连接蛋白激酶活性	CDK1,CSNK1D,MAPK1,MAPK3,MAPK7,PLCB1,PLCB2,PRKACA,PRKACB,PRKACG,PRKCA,PRKCB,PRKCG,PRKG1,PRKG2,SRC.
微管蛋白质	TUBA1C,TUBA3C,TUBA4A,TUBA4B,TUBA8,TUBAL3,TUBB,TUBB1,TUBB2A,TUBB2B,TUBB3,TUBB4A,TUBB4B,TUBB7P,TUBB8.
G蛋白信号	GNAI1,GRB2,HRAS,KRAS,NRAS,RAF1,SOS1,SOS2
钙和蛋白激酶C信号传导	GRM1,HTR2A,ITPR1,ITPR2,PLCB1,PLCB2,PRKCA,PRKCB,PRKCG
cAMP和蛋白激酶A信号	ADCY1,ADCY2,ADCY3,ADRB2,PRKACA,PRKACB,PRKACG.
cGMP、一氧化氮和蛋白激酶G信号传导	GUCY1A1,GUCY1A2,GUCY1B1,PRKG1,PRKG2.
MAP激酶信号传导	MAP2K1,MAP2K2 ,MAP2K5,MAP3K2,MAPK1,MAPK3,MAPK7

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.