产品介绍：

       进化上保守的 Hedgehog (Hh) 通路对于正常胚胎发育至关重要，在控制细胞增殖、组织模式、干细胞维持和发育中具有多种作用。初级纤毛是脊椎动物中刺猬信号转导的重要中心。在 Hh 不存在的情况下，Ptch 受体定位于纤毛，在抑制 Smo 激活。 Gli 蛋白被 PKA、CKI 和 GSK3B 磷酸化，并部分降解为截短的 Gli 阻遏物形式 (GliR)，抑制 Hh 靶基因在细胞核中的转录。在 Hh 的存在下，Ptch 从纤毛中消失，激活的 Smo 有助于蛋白质复合物 Gli、Sufu、Kif7 易位至纤毛尖端，其中 Gli 与负调节剂 Sufu 分离。发生 Gli 激活剂形式 (GliA) 的产生，并且 GliA 的核积累增加导致 Hh 靶基因的激活转录。异常的 Hh 信号传导还导致越来越多的癌症的发生，包括经典的基底细胞癌、成神经管细胞瘤和横纹肌肉瘤。了解控制 Hh 通路活性的机制将为开发新疗法以治疗越来越多的 Hh 驱动的病理提供信息。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Hedgehog Signaling Pathway PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	wc-mRNA0065-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Bcl2

Btrc

CSNK1G1

Erbb4

Gli3

Kctd11

Nf2

Ptchd2

Stk3

Wnt11

Wnt5b

Zic1

B

Bmp2

Cdon

CSNK1G2

Fbxw11

Grem1

Lats1

Npc1

Rab23

Sufu

Wnt16

Wnt6

Zic2

C

Bmp4

CEP76

CSNK1G3

Fgf9

Gsk3b

Lats2

Numb

Rassf4

Tp53

Wnt2

Wnt7a

Ptch1

D

Bmp5

CREBBP

Ctnnb1

Fgfr3

Hhat

Lrp2

Otx2

Runx2

Vegfa

Wnt2b

Wnt7b

Smo

E

Bmp6

CRIM1

Dchs1

Fkbp8

Hhip

Mapk1

Pdgfra

Sfrp1

Wif1

Wnt3

Wnt8a

Wnt10b

F

Bmp7

Csnk1a1

Dhh

Foxe1

Ift52

Mdm2

Prkaca

Shh

Wnt1

Wnt3a

Wnt8b

Wnt5a

G

Bmp8a

Csnk1e

Disp1

Gli1

Igf2

Mob1b

Prkacb

Shox2

Wnt10a

Wnt4

Wnt9a

Wnt9b

H

Boc

Csnk1g1

Disp2

Gli2

Ihh

Mtss1

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（rat）	相关基因
Hedgehog配体和调节因子	Boc,Cdon,Dhh,Hhip,Ihh,Shh.
Hedgehog 受体和辅因子	Disp3,Lrp2,Ptch1,Rab23,Smo.
转录因子和调节因子	Btrc ,Csnk1a1,Csnk1e,Csnk1g1,Csnk1g2,Csnk1g3,Fbxw11,Gli1,Gli2,Gli3,Gsk3b,Prkaca,Prkacb,Sufu,Zic1,Zic2 ,Crebbp,
Hedgehog信号靶基因	Bcl2,Bmp2,Bmp4,Bmp5,Bmp6,Bmp7,Bmp8a,Igf2,Mdm2,Mtss1,Pdgfra,Ptch1,Vegfa,Wnt1,Wnt10a,Wnt10b,Wnt11,Wnt16, Wnt2,Wnt2b,Wnt3,Wnt3a,Wnt4,Wnt5a,Wnt5b,Wnt6,Wnt7a,Wnt7b,Wnt8a,Wnt8b,Wnt9a,Wnt9b.
TGFβ/BMP 信号转导	Bmp2,Bmp4,Bmp5,Bmp6,Bmp7,Grem1,Sfrp1.
WNT 信号	Btrc ,Ctnnb1,Fbxw11,Fgf9,Gsk3b,Lats1,Lats2,Wif1,Wnt1,Wnt10a,Wnt10b,Wnt11,Wnt16,Wnt2,Wnt2b,Wnt3,Wnt3a,Wnt4, Wnt5a,Wnt5b,Wnt6,Wnt7a,Wnt7b,Wnt8a,Wnt8b,Wnt9a,Wnt9b.
Hippo信号	Dchs1,Lats1,Lats2,Mob1b,Nf2,Rassf4,Stk3.
其他Hedgehog信号基因	Disp1,Disp2,Fgf9,Fkbp8,Hhat,Ift52,Kctd11,Npc1,Otx2,Shox2,Erbb4,Fgfr3,Foxe1,Mapk1 ,Numb,Runx2,Tp53 .

 

Hedgehog信号通路图：

 

 图片来源于：https://www.genome.jp/pathway/map04340

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.