产品介绍：

        血细胞的发育从造血干细胞（HSC）开始，造血干细胞可以自我更新或分化为多谱系祖细胞：常见淋巴祖细胞（CLP）或常见髓系祖细胞（CMP）。CLP产生白细胞或白细胞的淋巴谱系，即自然杀伤细胞（NK）以及T和B淋巴细胞。CMP产生髓系，髓系包括其余的白细胞、红细胞（红细胞）和巨核细胞，这些细胞产生对凝血很重要的血小板。经历这些分化过程的细胞表达一组阶段和谱系特异性的表面标记。因此，通过这些基因的特定表达模式来识别细胞阶段。

        WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Hematopoietic cell lineage PCR Array
种    属：	HUMAN
货    号：	wc-mRNA0182-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

HUMAN

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

CD24

LOC102723407

CR1

CR1L

CR2

CSF1

CSF1R

CSF2

CSF2RA

CSF3

CSF3R

CD55

B

DNTT

EPO

EPOR

FCER2

FCGR1A

FLT3

FLT3LG

GP1BA

GP1BB

GP5

GP9

ANPEP

C

GYPA

HLA-         DMA

HLA-DMB

HLA-DOA

HLA-DOB

HLA-DPA1

HLA-DPB1

HLA-DQA1

HLA-DQA2

HLA-DQB1

HLA-DRA

HLA-DRB1

D

HLA-DRB3

HLA-         DRB4

HLA-DRB5

IL1A

IL1B

IL1R1

IL2RA

IL3

IL3RA

IL4

IL4R

IL5

E

IL5RA

IL6

IL6R

IL7

IL7R

IL9R

IL11

IL11RA

ITGA6

ITGA1

ITGA2

ITGA2B

F

ITGA3

ITGA4

ITGA5

ITGAM

ITGB3

CD38

CD44

CD59

CD36

CD37

TNF

CD34

G

CD1A

CD1B

CD1C

CD1D

CD1E

CD2

CD3D

CD3E

CD3G

CD4

CD5

CD7

H

CD8A

CD8B

CD33

CD9

CD14

CD19

MS4A1

CD22

ACTB

GAPDH

18s

hrpt1

造血细胞谱系通路图：

图片来源于：https://www.genome.jp/kegg-bin/show_pathway?map04640

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.