产品介绍：

     乙型肝炎病毒（HBV）是一种包膜病毒，含有部分双链松弛环状DNA（RC-DNA）基因组。进入肝细胞后，HBV RC-DNA被转运到细胞核并转化为共价封闭的环状分子cccDNA。cccDNA是包括前基因组RNA（pgRNA）在内的所有病毒RNA的转录模板，编码7种病毒蛋白：形成表面抗原（HBsAg）、核心抗原（HBcAg）、e抗原（HBeAg）、HBV聚合酶和调节蛋白X（HBx）的大、中和小包膜蛋白（LHBs、MHBs和SHBs）。pgRNA与病毒聚合酶蛋白相互作用，启动进入核心颗粒的外壳。通过内质网，核心颗粒完成与包膜蛋白的组装并被释放。HBV感染导致广泛的肝脏疾病，从慢性肝炎、肝硬化到肝细胞癌。肝损伤的机制尚不清楚。然而，HBV蛋白靶向宿主蛋白，参与多种功能，从而调节转录、细胞信号级联、增殖、分化和凋亡

     WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Hepatitis B PCR Array
种    属：	HUMAN
货    号：	wc-mRNA0295-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

HUMAN

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ANGPT2

AP1G1

APOA1

APOBEC3B

APOBEC3G

APOC3

BIRC5

CCR5

CD58

CDKN1A

CDKN2A

CTNNB1

B

CXCL10

DDB1

DDB2

DNAJB1

DNMT3A

EGR2

EGR3

EIF2AK2

ERN1

ESR1

ETS2

FAS

C

FASLG

FGL2

FLT4

GSK3B

HFE

HIF1A

HLA-A

HLA-DRB1

HMOX1

HNF1A

HNF4A

HP

D

HSPA5

HSPD1

IFNA1

IFNA2

IFNAR2

IFNB1

IFNG

IGF2

IL10

IL18

IL20

IL4

E

IL6

JAG1

KIR3DL1

LAMTOR5

MAPK14

MAPK8

MBL2

MIF

MIR122

MIR192

MMP14

MMP3

F

MX1

MYC

NEDD4

NFKB1

NR0B2

NR2F1

NR4A1

NR5A2

NRF1

PDCD1

PIN1

PTEN

G

PTGS2

RAF1

RXRA

SERPINB3

SERPINB4

SKP2

SLC10A1

SRC

SSB

TGFA

TGFB1

TIA1

H

TNF

TNFRSF1A

TP53

UGT1A7

WNT5A

XPO1

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

NTC

NTC

乙型肝炎通路图：

图片来源于：https://www.kegg.jp/kegg-bin/show_pathway?map05161

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.