产品介绍：

       肝脏在药物代谢中的关键作用使其成为引起药物相关毒性反应的主要器官之一，也是毒理学研究的重要靶点。在模型系统中这些毒性反应期间持续表现出增加或减少表达的基因可作为预测潜在不良临床结果的标记物。

       沃吉基因肝毒性PCR阵列包含五种主要药物引起的肝毒性疾病最相关的潜在生物标记物，包括胆汁淤积、脂肪变性、磷脂沉积、非遗传毒性肝致癌性和坏死，以及全身性肝毒性。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Hepatotoxicity PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0072-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ABCB1

ASAH1

CD36

Cyp3a11

FAM214A

HPN

L2HGDH

MLXIPL

PSME3

Scd1

SREBF1

WIPI1

B

ABCB11

ATP8B1

CD68

DDIT4L

FASN

HYOU1

LGR5

MRPS18B

PYGL

SERPINA3

TAGLN

YRDC

C

Abcb1a

AVPR1A

CDC14B

DDX39A

FMO1

ICAM1

LPL

NQO1

RB1

SERPINE1

THRSP

MCM10

D

ABCB4

BHMT

CDKN1A

DNAJB11

GADD45A

IGFALS

LSS

NUS1

RDX

SKIL

TIMM10B

PPARA

E

ABCC2

BTG2

COL4A1

DNAJC3

GCLC

IL6ST

MAOB

OSMR

RHBG

SLC17A3

TMEM2

SCD

F

ABCC3

CA3

CRYL1

EMC9

GSR

IPO4

MAP3K6

PDYN

Rplp2

SLC2A3

TXNRD1

SLC51A

G

ALDOA

CASP3

CXCL12

FABP1

HAO2

KRT18

MBL2

PLA2G12A

S100A8

SLC39A6

Ubc

Ugt1a1

H

APEX1

CCNG1

CYP1A2

FADS1

HMOX1

KRT8

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Human）		相关基因
胆汁淤积		ABCB1,ABCB4,ABCC2,ABCC3,ATP8B1,ICAM1,PDYN,RDX,SLC51A
脂肪变性	脂肪变性上调	CD36,FASN,LPL,SCD
	脂肪变性下调	PPARA,SREBF1
磷脂病	磷脂病上调	ASAH1,FABP1,HPN,LSS,MRPS18B,S100A8,SERPINA3,WIPI1
	磷脂病下调	SLC2A3,TAGLN
	在磷脂病中受到调节	ABCB1,TIMM10B
肝毒性	肝毒性上调	ALDOA,APEX1,BTG2,CASP3,CCNG1,CRYL1,DDIT4L,DNAJB11,DNAJC3,GADD45A,GCLC,GSR,HMO X1,HYOU1,KRT18,KRT8,NQO1,PLA2G12A,SLC17A3,TXNRD1,YRDC
	肝毒性下调	AVPR1A,BHMT,CA3,CXCL12,CYP1A2,FADS1,FMO1,HAO2,IGFALS,MBL2,RB1,THRSP
	肝毒性调节	ABCB11,MAOB,PYGL,TIMM10B.
非基因毒性肝癌	肝癌	ALDOA,APEX1,BTG2,CCNG1,CDKN1A ,DDX39A,KRT18,KRT8,MRPS18B,TXNRD1
坏死	坏死上调	Cd68,Col4a1,Il6st,Ipo4,Map3k6,Nus1,Osmr,Psme3,Serpine1,Skil,Slc39a6
	坏死时下调	Cdc14b,Emc9,Fam214a,L2hgdh,Lgr5,Mcm10,Mlxipl,Rhbg
	在坏死中调节	Cdkn1a

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.