产品介绍：

     肥厚型心肌病（HCM）是一种具有常染色体显性遗传模式的原发性心肌疾病，其特征是左心室肥大，具有心肌细胞肥大、原纤维紊乱和间质纤维化的组织学特征。HCM是最常见的遗传性心脏病之一，在年轻人中的患病率为1/500。HCM中已经鉴定出数百个编码肌节蛋白质成分的基因突变。这些突变增加了心肌丝对Ca2+的敏感性。肌丝Ca2+敏感性的增加预计会增加肌动蛋白在亚最大Ca2+浓度下对ATP的利用，这可能会导致严重压力下心脏能量供需失衡。ATP的低效使用表明，无法维持正常的ATP水平可能是中心异常。这一理论可能得到突变型PRKAG2基因在HCM中作用的发现的支持，该基因以活性形式作为保护细胞免受ATP供应耗尽的中央传感机制。myfilament Ca2+敏感性的增加很好地解释了HCM模型动物和人类患者的舒张功能障碍。人们普遍认为，左心室肥大不是主要表现，而是作为肌节功能障碍的代偿反应而发展起来的。
     WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Hypertrophic cardiomyopathy PCR Array
种    属：	HUMAN
货    号：	wc-mRNA0216-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ACE

ACTC1

ACTG1

AGT

APOE

ATP2A1

ATP2A2

ATP2A3

CACNA1C

CACNA1D

CACNA1F

CACNA1S

B

CACNA2D1

CACNA2D2

CACNA2D3

CACNA2D4

CACNB1

CACNB2

CACNB3

CACNB4

CACNG1

CACNG2

CACNG3

CACNG4

C

CACNG5

CACNG6

CACNG7

CACNG8

DAG1

DES

DMD

EDN1

EMD

IGF1

IL6

ITGA1

D

ITGA10

ITGA11

ITGA2

ITGA2B

ITGA3

ITGA4

ITGA5

ITGA6

ITGA7

ITGA8

ITGA9

ITGAV

E

ITGB1

ITGB3

ITGB4

ITGB5

ITGB6

ITGB7

ITGB8

LAMA1

LAMA2

LMNA

MYBPC3

MYH6

F

MYH7

MYL2

MYL3

PRKAA1

PRKAA2

PRKAB1

PRKAB2

PRKAG1

PRKAG2

PRKAG3

RYR2

SGCA

G

SGCB

SGCD

SGCG

SLC8A1

SLC8A2

SLC8A3

TGFB1

TGFB2

TGFB3

TNF

TNNC1

TNNI3

H

TNNT2

TPM1

TPM2

TPM3

TPM4

TTN

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

NTC

NTC

肥厚型心肌病通路图：

图片来源于：https://www.kegg.jp/kegg-bin/show_pathway?map05410

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.