产品介绍：

      氧是有氧能量代谢过程所必需的，例如氧化磷酸化。低氧条件主要通过缺氧诱导因子（HIF）转录因子激活真核细胞中的缺氧信号传导途径。HIF异二聚体由组成型表达的β亚基和其表达受到严格调节的3种α亚基同种型之一组成。氧的存在激活脯氨酰羟化酶以羟基化HIF，导致其多泛素化和降解。在低氧条件下，脯氨酰羟化酶失活允许HIF积累，启动靶基因表达。缺氧诱导的靶基因介导多种生物学功能，例如血管生成，造血和维持血管张力，以向组织提供或补充血液和氧气。缺氧信号传导失调通常发生在诸如肿瘤血管生成和慢性炎症的疾病中。

      沃吉基因缺氧信号通路PCR阵列包括HIF信号转录因子，HIF相互作用蛋白和通过多项研究鉴定的高度相关的靶基因等90个关键基因。

      WCGENE®PCRArrayPlate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Hypoxia Signaling Pathway PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0076-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

  基因列表

rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Adm

Adora2b

Aldoa

Angpt1

Angpt2

Angptl4

Ankrd37

Anxa2

Apex1

Arnt

Atr

Bhlhe40

B

Blm

Bnip3

Bnip3l

Btg1

Car9

Ccng2

Cdkn2a

Cops5

Ctsa

Ddit4

Dnajc5

Edn1

C

Ednra

Ednrb

Egln1

Egln2

Egln3

Egr1

Eif4ebp1

Eno1

Epo

Ero1l

F10

F3

D

Fos

Gpi

Gys1

Hif1a

Hif1an

Hif3a

Hk2

Hmox1

Hnf4a

Ier3

Igfbp3

Jmjd6

E

Ldha

Lgals3

Lox

Map3k1

Met

Mif

Mmp9

Mxi1

Nampt

Ndrg1

Nfkb1

Nos2

F

Nos3

Odc1

P4ha1

P4hb

Pdk1

Per1

Pfkfb3

Pfkfb4

Pfkl

Pfkp

Pgam1

Pgf

G

Pgk1

Pgm2

Pim1

Pkm

Plau

Rbpjl

Ruvbl2

Serpine1

Slc16a3

Slc2a1

Slc2a3

Tfrc

H

Tp53

Tpi1

Txnip

Usf2

Vdac1

Vegfa

Actb

Gapdh

Hprt1

Ubb

NTC

NTC

基因分类（Rat）		相关基因
HIF1和共转录因子		Arnt,Cops5,Hif1a,Hif1an,Hif3a,Hnf4a,Per1
其他HIF1交互器		Apex1,Cdkn2a,Egln1,Egln2,Nfkb1,P4ha1,P4hb,Tp53
低氧反应基因	血管生成	Adora2b,Angptl4,Anxa2,Btg1,Edn1,Egr1,Epo,F3,Gpi,Hmox1,Jmjd6,Lox,Mmp9,Pgf,Plau,Serpine1 ,Vegfa
	凝固	Aldoa,Anxa2,F10,F3,Plau,Serpine1,Slc16a3
	DNA损伤与修复	Mif,Ndrg1,Ruvbl2
	新陈代谢	Aldoa,Ddit4 ,Eno1,Gpi,Gys1,Hk2,Ldha,Pdk1,Pfkfb3,Pfkfb4,Pfkl,Pfkp,Pgam1,Pgk1,Pgm2,Pkm, Slc2a1,Slc2a3,Tpi1
	细胞凋亡的调节	Adm,Bnip3,Bnip3l,Btg1,Ddit4 ,Ier3,Mif ,Nos3 ,Pim1
	细胞增殖的调节	Adm,Blm,Btg1,Ccng2,Egr1,Igfbp3,Met,Mif ,Mxi1,Nampt,Nos3 ,Odc1,Pgf,Pim1,Txnip
	转录因子	Bhlhe40,Fos,Rbpjl,Usf2
	转运体、通道和受体	Slc16a3,Slc2a1,Slc2a3,Tfrc,Vdac1
其他低氧反应基因		Ankrd37,Car9,Ctsa,Dnajc5,Eif4ebp1,Lgals3,Map3k1

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.