产品介绍

路径描述

       IL-2（白细胞介素-2）是一种T细胞衍生的细胞因子，在与受体特异性相互作用后，对T细胞、B细胞、自然杀伤细胞、神经胶质瘤细胞和单核细胞系细胞的生长和分化的调节具有重要作用。人IL-2是一种133个氨基酸的多肽，分子量为15-18kDa。IL-2信号传导由由α（CD25）、β（CD122）和γ（CD132）链组成的多链受体复合物介导。IL-2R（IL-2受体）α亚基主要增加配体结合的亲和力，目前尚不清楚其是否含有信号结构域，而β和γ亚基参与配体结合和信号转导。IL-2R信号系统通过至少三种不同的途径进行，这些途径介导促有丝分裂和促生存信号的流动。其中一种途径通过蛋白酪氨酸激酶活性、Ras和MAPK（丝裂原活化蛋白激酶）级联进行，导致原癌基因c-Fos、c-Jun和Elk1的表达。负责c-Myc基因诱导的Syk启动第二条途径。最终的途径导致多种信号机制的介导，包括PI3K（磷脂酰肌醇-3激酶）和Akt/PKB（蛋白激酶B）。IL-2R信号传导激活PI3K，PI3K催化肌醇磷酸化。它们作为第二信使，将Akt激酶等分子募集到细胞膜上。Akt激酶被磷酸化进一步激活，随后正向或负向调节下游靶标如PKB的活性。IL-2还激活Lck（淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶），后者参与T细胞受体信号传导。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	IL2 Pathway PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0180-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

AKT1

IKBKG

KRAS

MAPK1

MAPK7

NFATC3

PIK3C2A

PIK3R2

PPP3CC

PRKCH

REL

STAT5B

B

CHUK

IL2

LCK

MAPK10

MAPK8

NFATC4

PIK3C2B

PIK3R3

PPP3R1

PRKCI

RELA

SYK

C

ELK1

IL2RA

MAP2K1

MAPK11

MAPK9

NFKB1

PIK3C2G

PIK3R4

PPP3R2

PRKCQ

RELB

PIK3R1

D

FOS

IL2RB

MAP2K2

MAPK12

MRAS

NFKB2

PIK3C3

PIK3R5

PRKCA

PRKCZ

RRAS

PPP3CB

E

GRB2

IL2RG

MAP2K3

MAPK13

MYC

NFKBIA

PIK3CA

PLCG1

PRKCB

PRKD1

RRAS2

PRKCG

F

HRAS

JAK1

MAP2K4

MAPK14

NFAT5

NFKBIB

PIK3CB

PLCG2

PRKCD

PRKD3

SHC1

RAF1

G

IKBKB

JAK3

MAP2K5

MAPK3

NFATC1

NFKBIE

PIK3CD

PPP3CA

PRKCE

PTEN

SHC2

SHC3

H

IKBKE

JUN

MAP2K6

MAPK6

NFATC2

NRAS

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.