产品介绍

路径描述

       IL-6（白细胞介素-6）是一种细胞因子，通过调节细胞生长、基因激活、增殖、存活和分化，引发广泛的细胞和生理反应，包括免疫反应、炎症、造血和致癌。IL-6通过由两个不同亚基组成的受体发出信号，一个是产生配体特异性的α亚基，另一个是GP（糖蛋白）130，这是IL-6家族中与其他细胞因子共同的受体亚基。IL-6与其受体的结合启动细胞事件，包括JAK（Janus激酶）激酶的激活和Ras介导的信号传导的激活。活化的JAK激酶磷酸化并激活STAT转录因子，特别是STAT3（信号转导子和转录激活子-3）和SHP2[SH2（Src同源-2）结构域含酪氨酸磷酸酶]。磷酸化的STAT3随后形成二聚体并易位到细胞核中以激活含有STAT3反应元件的基因的转录。STAT3对GP130介导的细胞存活和G1至S细胞周期转换信号至关重要。c-Myc和Pim都已被鉴定为STAT3的靶基因，它们一起可以抵补STAT3在细胞存活和细胞周期转换中的作用。SHP2将细胞因子受体与Ras/MAP（有丝分裂原活化蛋白）激酶途径连接，对有丝分裂活性至关重要。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	IL6 Pathway PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0181-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

AKT1

CXCL12

IL18

IL8

MAP2K6

NFKB2

PIK3C3

PIK3R5

PPP2R1B

RAF1

SHC3

TNF

B

ARAF

FRAP1

IL1A

JAK3

MAPK1

NFKBIA

PIK3CA

PIM1

PPP2R2A

REL

SOCS1

TP53BP2

C

BAX

GRB2

IL1B

KRAS

MAPK12

NFKBIB

PIK3CB

PPP1R12A

PPP2R2B

RELA

SOCS2

PIK3R4

D

BCL2

HRAS

IL2

MAP2K1

MAPK3

NFKBIE

PIK3CD

PPP1R15A

PPP2R4

RELB

SOCS3

PPP2R1A

E

BRAF

IKBKB

IL4

MAP2K2

MAPK6

PIAS3

PIK3R1

PPP1R1B

PPP2R5A

RRAS

SOCS5

PTPN6

F

CCL2

IKBKE

IL6

MAP2K3

MAPK7

PIK3C2A

PIK3R2

PPP2CA

PPP2R5C

RRAS2

SOCS6

SHC2

G

CD4

IKBKG

IL6R

MAP2K4

MYC

PIK3C2B

PIK3R3

PPP2CB

PTPN11

SHC1

STAT3

TIMP1

H

CHUK

IL10

IL6ST

MAP2K5

NFKB1

PIK3C2G

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.