产品介绍

路径描述

       ECM（细胞外基质）为组织和器官的形成提供了结构框架。ECM与细胞表面的基质粘附分子结合，并影响调节存活、增殖、极性和分化的各种细胞内信号通路。与ECM结合的重要粘附分子家族是整合素。整合素由α和β亚基组成，由大的细胞外结构域和相对较小的细胞质结构域组成。配体结合激活信号级联，从而在细胞粘附到ECM的位点组装多蛋白复合物。这些事件对细胞有两个重要影响：它们在ECM和肌动蛋白细胞骨架之间建立联系，并改变许多细胞内信号通路的流量。作为整合素介导的信号传导的重要调节因子的三种蛋白质是ILK（整合素连接激酶）和衔接蛋白Pinch和Parv（Parvin），其中ILK是整合素介导信号传导的主要调节器。这些分子形成了一种异三聚物复合物，被称为IPP复合物，并以其成分的发现顺序命名。IPP复合物既是整合素和肌动蛋白细胞骨架之间的适配器，也是调节几种信号通路的枢纽。ILK的主要功能是将整合素连接到细胞骨架上。ILK将其他衔接分子募集到一个大型复合体中，以调节肌动蛋白动力学和整合素功能。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	ILK Signaling PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0183-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ACTN1

CASP3

CFL1

EGFR

HIF1A

ITGAV

LIMS1

MYH7

PDPK1

PTK2B

SNAI1

VEGFA

B

AKT1

CASP9

CHUK

ERBB2

HNF1A

ITGB1

LIMS2

MYH9

PIK3CA

PXN

SNAI2

VIM

C

AKT2

CCND1

COL1A1

FERMT2

HNF4A

ITGB2

MAPK1

NACA

PIK3R1

RAC1

SPP1

MYC

D

ARHGEF6

CDC42

COL1A2

FLNA

IGF1R

ITGB3

MAPK3

NCK2

PPP1R14B

RELA

TCF7L2

PARVB

E

ATF2

CDH1

COL2A1

FN1

IL6

JUN

MAPK8

NFKB1

PPP2CA

RHOA

TGFB1I1

PTK2

F

ATF3

CDH2

CREB1

FOS

ILK

KDR

MAPK9

NOS2

PTEN

RPS6KA4

TMSB4Y

RSU1

G

BAD

CDH5

CTNNB1

FRAP1

IRS1

KIT

MUC1

PARVA

PTGS2

RPS6KA5

TNF

TNFRSF1A

H

BCAR1

CEBPB

DSP

GSK3B

ITGA2B

KRT18

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.