产品介绍：

iPSC有望通过将成年体细胞转化为能够分化为多种细胞类型中任何一种的多能细胞，从而为多种疾病提供治疗，从而避免胚胎干细胞（ESC）使用的伦理。该过程开始于用体外表达特定转录因子（KLF4、MYC、POU5F1和/或SOX2）组合的构建体转染或转导体细胞（如角质细胞）。这些转录因子重新编程或诱导体细胞“去分化”，失去原始细胞类型的标记，获得多能干细胞的标记。通常，额外转录因子（如ESRRB、LIN28A、NANOG、MYCN和/或NR5A2）的组合提高诱导效率。为了控制该过程，必须同时监测该阵列中包括的多个基因类的表达：代表性亲本细胞系基因、异位表达的转录因子、iPSCs标记物以及再分化为外胚层、内胚层和中胚层的标记物。ESC和iPSC在功能上已被证明不相同。因此，该阵列还分析了两种细胞类型中高度表达的基因，以帮助区分它们并更好地理解它们的差异。因为在这些类型的研究中，典型的持家基因或参考基因的表达通常被证明是不一致的，所以如果需要，该阵列包括用于iPSC基因表达的另一个基因（NAT1），用于数据标准化。

WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Induced Pluripotent Stem Cells PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0079-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Actc1

Brix1

Cdk1

Ep300

Gabrb3

Hdac2

Lefty1

Nat1

Olig2

Rest

Tbx3

XIST

B

Aicda

Ccna2

Col1a1

Esrrb

Gata2

Hnf4a

Lefty2

Ncam1

Otx2

Runx1

Tcf7l1

Zfp42

C

Aldh1a1

Ccne1

Col2a1

Fabp7

Gata4

Hspa9

Lin28a

Nes

Pard6a

Runx2

Tdgf1

Nanog

D

Aldh2

Cd34

Col9a1

Fgf2

Gdf3

Kat2a

Mesp1

Nodal

Pax6

SEMA3A

Tert

Numb

E

Alpl

Cd9

Dnmt3b

Fgf4

Gja1

Kat7

Mybl2

NOG

Pecam1

Sox15

Tp53

PTEN

F

Apc

Cdc42

Dppa2

Fgfr1

Gjb2

Kat8

Myc

NPPA

Podxl

Sox17

Tubb3

Sycp3

G

Bglap

Cdh1

Dppa3

Foxa2

Grb7

Klf4

Mycn

Nr5a2

Pou5f1

Sox2

Utf1

WT1

H

Bmp2

Cdh2

Emx2

Foxd3

Hand1

Krt15

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Rat）		相关基因
体细胞标记	角蛋白细胞	Cdh1,Gjb2,Krt15,Numb.
	血液干细胞	Cd34.
	成纤维细胞	Col1a1,Ncam1
	神经干细胞	Emx2,Fabp7,Nes,Olig2.
	心肌细胞	Pecam1.
	生殖细胞	Sycp3.
诱导的多能干细胞	诱导多能干细胞标记物	Dnmt3b,Podxl,Zfp42
	其他诱导的多能干细胞相关基因	Actc1,Aldh1a1,Aldh2,Apc,Bglap,Bmp2,Brix1,Ccne1,Cd9,Cdh2,Col2a1,Col9a1,Ep300,Fgf4,Fgfr1,Foxd3, Gabrb3,Gja1,Grb7,Hdac2,Kat2a,Kat7,Kat8,Lefty1,Lefty2,Nodal,Pard6a,Rest,Runx2,Tert.
重新编程因素		Klf4,Myc,Pou5f1,Sox2.
其他重新编程因素		Esrrb,Lin28a,Mycn,Nanog,Nr5a2
重编程增强子和抑制剂		Aicda,Tp53,Utf1.
胚胎干细胞	胚胎干细胞标记	Alpl,Gdf3,Tdgf1,Tert.
	其他胚胎干细胞相关基因	Ccna2,Cdc42,Cdk1,Dppa2,Dppa3,Fgf2 ,Hspa9,Mybl2,Otx2,Sox15,Tbx3,Tcf7l1
多能性标记		Alpl,Dnmt3b,Fgf4,Foxd3,Gdf3,Lefty1,Lefty2,Nodal,Podxl,Utf1,Zfp42
早期分化标记	外胚层	Col1a1,Ncam1,Nes,Pax6,Tubb3
	中胚层	Cd34,Gata2,Hand1,Mesp1,Pecam1,Runx1
	内胚层	Foxa2,Gata4,Hnf4a,Sox17
管家基因		Nat1

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.