产品介绍：

       与NOD1/2相反，一些NLRP作为大分子复合物发挥作用，称为“炎症小体”。这些多蛋白平台控制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶caspase-1的激活，从而随后将前白细胞介素1B（前IL1B）切割成活性促炎细胞因子IL1B。半胱天冬酶-1的激活对于IL1B和IL18的产生至关重要，这两种蛋白分别结合和激活IL1受体（IL1R）和IL18受体（IL18R）复合物。IL1R和IL18R激活NFkappaB和其他信号级联。由于炎性体的激活导致caspase-1激活，炎性体可被视为IL1R和IL18R信号级联的上游步骤，将细胞内病原体感应与Toll样受体（TLR）介导的免疫应答途径联系起来。单核细胞和巨噬细胞在受到刺激（通常是TLR）之前不表达pro-IL1B（Franchi等人，2009）。除非第二刺激激活炎症体，否则产生的pro-IL1B不会转化为IL1B。对两种不同刺激的这种要求允许严格调节IL-1B/IL-18的产生，这是必要的，因为过度的IL-1a产生与许多炎症疾病相关，如痛风和类风湿性关节炎（Masters等人，2009）。炎症小体至少有四种亚型，以NLRP为特征。此外，蛋白质AIM2可形成炎性体。NLRP1（NALP1）、NLRP3（Cryopyrin，NALP3）、IPAF（CARD12，NLRC4）和AIM2炎性体在体内都具有明确的生理作用。已证明NLRP2、NLRP6、NLRP7、NLRP10和NLRP12在体外可调节半胱天冬酶-1活性，但其意义尚不清楚（Mariathasan和Monack，2007）。NLRP3和AIM2通过PYD-PYD结构域相互作用结合含有CARD（ASC，也称为PYCARD）的蛋白“凋亡相关斑点样蛋白”。这反过来又通过卡-卡交互招募procaspase-1。NLRP1和IPAF包含CARD结构域，可以直接结合procaspase-1，尽管两者都受到ASC的刺激。据信，NLRP的寡聚使原蛋白酶接近，导致“诱导接近”自动激活（Boatright等人，2003年）。这导致活性半胱氨酸蛋白酶四聚体的形成。NLRP通常被认为是细胞质蛋白质，但有证据表明家族成员CIITA的细胞质核穿梭（LeibundGut-Landmann等人，2004年）和神经元和淋巴细胞细胞核中的组织/细胞依赖性NALP1表达（Kummer等人，2007年）；这一点的意义尚不清楚

该阵列包括编码炎性体成分的基因以及参与下游信号传导和抑制炎性体功能的基因。

       WCGENE®PCRArrayPlate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Inflammasomes PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0078-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

AIM2

BCL2

BCL2L1

BIRC2

BIRC3

CARD18

CARD6

CASP1

CASP12

CASP4

CASP5

CASP8

B

CCL2

CCL5

CCL7

CD36

CD40LG

CFLAR

CHUK

CIITA

CTSB

CXCL1

CXCL2

DDX3X

C

FADD

HSP90AA1

HSP90B1

IFNB1

IFNG

IKBKB

IKBKG

IL12A

IL12B

IL18

IL1A

IL1B

D

IL33

IL6

IRAK1

IRF1

IRF2

MAP3K7

MAPK1

MAPK11

MAPK12

MAPK13

MAPK3

MAPK8

E

MAPK9

MEFV

MOK

MYD88

NAIP

NFKB1

NFKBIA

NFKBIB

NLRC3

NLRC4

NLRC5

NLRP1

F

NLRP12

NLRP3

NLRP4

NLRP5

NLRP6

NLRP9

NLRX1

NOD1

NOD2

P2RX7

PANX1

PEA15

G

PSTPIP1

PTGS2

PYCARD

PYDC1

RELA

RIPK2

SUGT1

TAB1

TAB2

TIRAP

TLR4

TNF

H

TNFSF11

TNFSF14

TNFSF4

TRAF6

TXNIP

XIAP

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

NTC

NTC

基因分类（Human）	相关基因
炎症小体	AIM2,CASP1,PYCARD,CASP1,NAIP,NLRC4,PYCARD ,NLRP1，CASP1,CASP5,NLRP1，NLRP3，CASP1,NLRP3,PYCARD
炎症小体的负调节	BCL2,BCL2L1 ,CARD18,CD40LG,CTSB,HSP90AA1,HSP90B1,MEFV,PSTPIP1,PYDC1,SUGT1,TNF,TNFSF11,TNFSF14,
炎症小体下游的信号传导	IFNG,IL12A,IL12B,IL18,IL1B,IL33,IRAK1,IRF1,MOK,MYD88,P2RX7,PANX1,PTGS2 ,RIPK2,TIRAP,TXNIP
NOD样受体	CIITA,NAIP,NLRC4,NLRC5,NLRP1,NLRP12,NLRP3,NLRP4,NLRP5,NLRP6,NLRP9,NLRX1,NOD1,NOD2
NOD样受体下游的信号传导	BIRC2,BIRC3,CARD6,CASP8 ,CCL2 ,CCL5,CCL7 ,CFLAR ,CHUK ,CXCL1,CXCL2 ,FADD,IFNB1,IKBKB,IKBKG,IL6,IRF1,IRF2,MAP3K7,MAPK1,MAPK11,MAPK12 ,MAPK13,MAPK3 ,MAPK8 ,MAPK9 ,NFKB1,NFKBIA ,NFKBIB ,PEA15,RELA,RIPK2,SUGT1,TAB1,TAB2,TNF,TRAF6,XIAP
促炎性半胱天冬酶	CASP1,CASP5

炎性小体通路图：

图片来源：https://reactome.org/content/detail/R-HSA-622312

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.