产品介绍：

       胰岛素是控制葡萄糖和脂质代谢等关键能量功能的主要激素。胰岛素通过与特定受体结合，引发多种生物反应。胰岛素受体属于受体酪氨酸激酶的一个亚家族，包括IGF（胰岛素样生长因子）受体和IRR（胰岛素受体相关受体）。这些受体是由两个α亚基和两个β亚基组成的四聚体蛋白质，作为变构酶发挥作用，其中α亚基抑制β亚基的酪氨酸激酶活性。胰岛素对细胞有多种作用，包括刺激葡萄糖转运、基因表达和细胞形态的改变。该激素通过激活信号通路来调节这些作用，信号通路利用i）衔接分子，如IRS（胰岛素受体底物）、SHC（Src和胶原同系物）和GRB2（生长因子受体结合蛋白-2），ii）脂质激酶，如PI3K（磷脂酰肌醇3-激酶），iii）小G蛋白，如Rac，以及iv）丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸激酶。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Insulin Receptor Pathway PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0184-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

AKT1

EIF2B1

EIF4G2

FYN

IGF1

MAP2K2

MAPK3

PIK3C2A

PPP1R1B

RAB4A

RRAS2

YWHAE

B

ARAF

EIF2B4

ELK1

GRB10

INS

MAP2K3

MAPK6

PIK3CA

PPP1R8

RAC1

SH2B2

YWHAH

C

BAD

EIF2B5

ELK3

GRB2

INSR

MAP2K4

MAPK7

PIK3CB

PRKCA

RAC2

SHC1

PDPK1

D

BRAF

EIF4A1

FLOT1

GSK3A

INSRR

MAP2K5

MAPK8

PIK3CD

PRKCB

RAC3

SHC3

PPP1R15A

E

CBL

EIF4E

FLOT2

GSK3B

IRS1

MAP2K6

MAPK9

PIK3R1

PRKCD

RAF1

SLC2A4

PRKCZ

F

CRK

EIF4EBP1

FOS

GYS1

JUN

MAPK1

NCK1

PIK3R2

PRKCE

RPS6

SOS1

RRAS

G

EEF2

EIF4EBP2

FOXO3

HRAS

KRAS

MAPK10

NRAS

PPP1R12A

PRKCQ

RPS6KB1

TP53BP2

YWHAB

H

EEF2K

EIF4G1

FRAP1

IGF2

MAP2K1

MAPK12

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

NTC

NTC

胰岛素受体通路图

 

 

图片来源于：https://www.wikipathways.org/index.php/Pathway:WP1913#nogo2

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.