产品介绍：

      在食物消耗期间，胰岛素释放激活胰岛素信号传导和细胞摄取葡萄糖，导致碳水化合物和脂质的合成和储存。对胰岛素的抵抗可能在生命后期发展，特别是在长期高热量饮食后，并且与其他危险因素相关。由于残余血糖，胰岛素抵抗者易患多种病理生理，包括NIDDM或2型糖尿病。NIDDM通常伴有肥胖和其他相关疾病（即心血管疾病），统称为代谢综合征。胰岛素抵抗是肥胖和NIDDM之间的一个关键环节，可能由脂肪组织、胰岛、肝脏和骨骼肌之间的复杂信号调节失调引起。脂肪组织通过释放称为脂肪因子。此外，先天免疫系统的激活与脂肪组织炎症和通过NLRP3炎症小体产生胰岛素抵抗有关。这种组织在肥胖期间是慢性炎症，其特征是炎性细胞因子和白细胞浸润增加。该阵列包括参与胰岛素和脂肪因子信号传导的脂肪基因、通常在NIDDM中失调的基因，参与先天免疫和炎症过程的基因，以及对碳水化合物和脂质代谢重要的酶和转运蛋白

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

 

产品内容

品    名：	Insulin Resistance PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0081-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Acaca

Akt3

Ccr6

Cxcr3

Igf1

Insr

Lpl

Ncoa5

Pik3ca

Rela

Srebf1

Vldlr

B

Acacb

Alox5

Cd36

Cxcr4

Igf1r

Irs1

Lta4h

Nfkbia

Pik3r1

Retn

Srebf2

Zeb1

C

Acsl1

Apoe

Cd3e

Emr1

Ikbkb

Irs2

Map2k1

Nlrp3

Ppara

Rps6kb1

Stat3

Ncoa3

D

Acsl4

Atm

Cebpa

Fabp4

Il18r1

Jak2

Mapk3

Olr1

Pparg

Scd1

Tlr4

Pdx1

E

Adipoq

Casp1

Chuk

Fasn

Il1b

Lep

Mapk9

Pck1

Ppargc1a

Serpine1

Tnf

Rbp4

F

Adipor1

Ccl12

Cnbp

Gys1

Il1r1

Lepr

Mtor

Pde3b

Ptpn1

Slc27a1

Tnfrsf1a

Socs3

G

Adipor2

Ccr4

Crlf2

Hk2

Il23r

Lipa

Nampt

Pdk2

Pycard

Slc2a4

Tnfrsf1b

Ucp1

H

Akt2

Ccr5

Cs

Ifng

Il6

Lipe

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分（Mouse）	基因分类
胰岛素信号	Akt3,Gys1,Igf1,Igf1r,Ikbkb ,Insr,Irs1,Irs2,Map2k1,Mapk3,Mapk9,Mtor,Pde3b,Pik3ca,Pik3r1,Ppargc1a,Ptpn1,Rps6kb1,Slc2a4,Socs3,Srebf1.
非胰岛素依赖型糖尿病	Adipoq,Hk2,Ikbkb,Insr,Irs1,Irs2,Mapk3,Mapk9,Mtor,Pdx1,Pik3ca,Pik3r1 ,Slc2a4,Socs3,Tnf.
脂肪因子	Adipoq,Il6,Lep,Nampt,Retn,Serpine1,Tnf.
受体和转运蛋白	Adipor1,Adipor2,Cd36,Lepr,Slc2a4,Tnfrsf1a ,Tnfrsf1b
脂肪因子下游信号	Akt3,Chuk,Ikbkb,Irs1,Irs2,Jak2,Mapk9,Mtor,Nfkbia,Ppara,Ppargc1a,Rela,Socs3,Stat3
先天免疫	Casp1,Chuk,Ikbkb,Irs1,Irs2,Nfkbia,Nlrp3,Pycard,Rela,Tlr4.
炎症反应	Alox5,Casp1,Ccl12,Ccr4,Ccr5,Chuk,Cxcr4,Ifng,Ikbkb,Il1b,Il23r,Il6,Lta4h,Nlrp3,Olr1,Pycard,Rela,Tnf,Tnfrsf1a,Tnfrsf1b.
细胞凋亡	Casp1 ,Ikbkb ,Irs2,Jak2,Mapk9,Nfkbia,Nlrp3,Pik3ca,Pparg,Pycard,Rela,Rps6kb1,Serpine1,Socs3,Tnf,Tnfrsf1a,Tnfrsf1b.
碳水化合物代谢	Cs,Gys1,Hk2,Pck1,Pdk2
脂质代谢	Acaca,Acacb,Acsl1,Acsl4,Apoe,Cebpa,Cnbp,Fabp4,Fasn,Lepr,Lipe,Lpl,Ppara,Pparg,Ppargc1a ,Scd1,Srebf1,Srebf2.
代谢产物运输	Apoe,Cd36,Fabp4,Rbp4,Slc27a1,Slc2a4 ,Ucp1,Vldlr.
巨噬细胞	Adgre1,Ccr5,Cxcr4.
Th1 细胞	Ccr5,Cd3e,Cxcr3,Il18r1.
Th2 细胞	Ccr4,Cd3e,Crlf2,Il1r1.
Th17 细胞	Ccr6,Cd3e,Il23r.

胰岛素抗性通路图：

图片来源于：https://www.kegg.jp/kegg-bin/show_pathway?map04931

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.