产品介绍：

沃吉基因胰岛素信号通路PCR阵列该阵列表示与胰岛素受体相关的基因和胰岛素信号的靶基因。参与碳水化合物、脂类和蛋白质代谢以及其他相关生物反应的基因也包括在内，该阵列还包含PI3K和MAPK通路的成员

WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Insulin Signaling Pathway PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0086-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ACACA

ACOX1

ADRB3

AEBP1

AKT1

AKT2

AKT3

ANG

ARAF

BCL2L1

BRAF

CAP1

B

CBL

CEBPA

CEBPB

DOK1

DOK2

DOK3

DUSP14

EIF2B1

EIF4EBP1

ERCC1

FASN

FBP1

C

FOS

FRS2

FRS3

G6PC1

GAB1

GCK

GPD1

GRB2

GSK3A

GSK3B

HK2

HRAS

D

IGF1R

IGF2

IGFBP1

INS

INSL3

INSR

IRS1

IRS2

IRS4

JUN

KRAS

LDLR

E

LEP

MAP2K1

MAP2K2

MAP2K3

MAP2K4

MAPK1

MTOR

NCK1

NOS2

NPY

PCK2

PDPK1

F

PIK3CA

PIK3R1

PIK3R2

PKM

PPARG

PPP1CA

PRKCG

PRKCI

PRKCZ

PRL

PTPN1

PTPRF

G

RAF1

RETN

RPS6KA1

RRAS

RRAS2

SERPINE1

SHC1

SHC2

SHC3

SLC2A1

SLC2A4

SORBS1

H

SOS1

SOS2

SREBF1

TG

UCP1

VEGFA

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

NTC

NTC

基因分类（Human）		相关基因
胰岛素受体相关蛋白	胰岛素和受体	INS,INSL3,IRS1,IRS2,IRS4,SORBS1.
	胰岛素样生长因子和受体	IGF1R,IGF2,IGFBP1.
	SH3/SH2衔接蛋白	CBL,GAB1,GRB2,IRS4,NCK1.
其他胰岛素受体相关蛋白		CAP1,DOK1,DOK2,DOK3,FRS2,FRS3,INSR,PDPK1,PPP1CA,PTPN1,PTPRF,SHC1
PI3激酶信号传导	PI3激酶信号通路基因	AKT1,AKT2,AKT3,EIF2B1,EIF4EBP1,GSK3A,GSK3B,MTOR,PDPK1,PIK3CA,PIK3R1,PIK3R2,PRKCG,PRKCI,PRKCZ.
	PI3激酶信号转导靶基因	BCL2L1 ,DUSP14,G6PC,HK2,IGFBP1,PCK2,SERPINE1,SLC2A4,SREBF1,UCP1,VEGFA
MAP激酶信号传导	MAP激酶信号通路基因	ARAF,BRAF,EIF2B1,GRB2,HRAS,MAP2K1,MAPK1 ,RAF1,RPS6KA1,RRAS,RRAS2,SHC1,SOS1.
	MAP激酶信号传导靶基因	ANG,BCL2L1,ERCC1,FOS,LDLR,NOS2,UCP1.
原始胰岛素信号靶基因		CEBPA,CEBPB,FOS,JUN,LEP,PRL.
二级胰岛素信号传导效应器靶基因		NPY,PCK2,SLC2A1,SLC2A4,TG
PPARγ靶		ACOX1,ADRB3,AEBP1,CAP1,CEBPA,CEBPB,PCK2,PPARG,RETN
SREBP1目标		ACACA,FBP1,G6PC,GCK,PCK2,PKM.
葡萄糖代谢		FBP1,G6PC,GCK,HK2,INS,IRS2,PCK2,PKM,SLC2A1,SLC2A4 ,SORBS1.
糖原代谢		G6PC,GSK3B,PPP1CA
其他碳水化合物代谢基因		ADRB3,GPD1,INSR
胆固醇代谢		LDLR,SREBF1
脂肪酸代谢		ACACA,ACOX1,FASN
脂质转运		LDLR,SORBS1
其他脂质代谢基因		ARAF,BRAF,INS,LEP,PPARG,PRKCG,PRKCI,PRKCZ,RAF1,SHC1
蛋白质磷酸酶		DUSP14,PPP1CA,PTPN1,PTPRF.
蛋白激酶类		AKT1,AKT2,AKT3,ARAF,BRAF,GSK3A,GSK3B,IGF1R,INSL3,INSR,MAP2K1,MAPK1,PDPK1,PRKCG,PRKCI,PRKCZ,RAF1,RPS6KA1.
蛋白质生物合成		ANG,EIF2B1,EIF4EBP1,LDLR,PPP1CA.
蛋白质运输		PRKCI,RRAS2.
其他蛋白质代谢基因		AEBP1,CBL,DOK1,DOK2,FRS2,GAB1,IRS1,NOS2,SORBS1,VEGFA
转录调控		CEBPA,CEBPB,FOS,JUN,PPARG,SREBF1
转录因子		AEBP1,CBL,CEBPA,CEBPB,FOS,JUN,PPARG,SREBF1
细胞周期		HK2,HRAS,IGF1R,IGF2,KRAS,MAPK1,MTOR,VEGFA.
细胞增殖		GAB1,IGF1R,IGF2,IRS2,NCK1,NPY,PRL,RAF1,SHC1,VEGFA
生长因子和受体		GAB1,GRB2,IGF1R,IGF2,IGFBP1,INSR,SHC1,VEGFA.
细胞分化		NOS2,PPARG.

胰岛素信号通路图：

图片来源于：https://www.genome.jp/kegg-bin/show_pathway?map04910

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.