产品介绍：

沃吉基因胰岛素信号通路PCR阵列该阵列表示与胰岛素受体相关的基因和胰岛素信号的靶基因。参与碳水化合物、脂类和蛋白质代谢以及其他相关生物反应的基因也包括在内，该阵列还包含PI3K和MAPK通路的成员

WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Insulin Signaling Pathway PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0086-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Acaca

Bcl2l1

Dok2

Frs2

Grb2

Ins1

Ldlr

Npy

Pparg

Raf1

Shc1

Ucp1

B

Acox1

Braf

Dok3

Frs3

GSK3A

Insl3

Lep

Pck2

Ppp1ca

Retn

Slc27a4

Vegfa

C

Adra1d

Cap1

Dusp14

G6pc

Gsk3b

Irs1

Map2k1

Pdpk1

Prkcg

Rps6ka1

Slc2a1

Nos2

D

Aebp1

Cbl

Eif2b1

G6pc2

Hk2

Irs2

MAP2K2

Pik3ca

Prkci

RPS6KA2

Sorbs1

Pklr

E

Akt1

Cebpa

Eif4ebp1

Gab1

Hras1

IRS4

Mapk1

Pik3cb

Prkcz

RPS6KA3

Sos1

Ptprf

F

Akt2

Cebpb

Ercc1

Gck

Igf1r

Jun

Mtor

Pik3r1

Prl

Rras

SOS2

Serpine1

G

Akt3

Cfd (Adn)

Fbp1

Gpd1

Igf2

Klf10 (Tieg1)

Nck1

Pik3r2

Ptpn1

Rras2

Srebf1

Tg

H

Araf

Dok1

Fos

Grb10

Igfbp1

Kras

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Mouse）		相关基因
胰岛素受体相关蛋白	胰岛素和受体	Ins1,Insl3,Irs1,Irs2,Sorbs1.
	胰岛素样生长因子和受体	Grb10,Igf1r,Igfbp1
	SH3/SH2衔接蛋白	Cbl,Grb10,Grb2.
其他胰岛素受体相关蛋白		Dok1,Dok2,Dok3,Eif4ebp1,Frs2,Frs3,Gab1,Nck1,Ppp1ca,Ptpn1,Ptprf,Shc1
PI3激酶信号传导	PI3激酶信号通路基因	Akt1,Akt2,Akt3,Eif2b1,Mtor,Pdpk1,Pik3ca,Pik3cb,Pik3r1,Pik3r2,Prkcg,Prkci,Prkcz.
	PI3激酶信号转导靶基因	Adra1d,Bcl2l1,Dusp14,G6pc,G6pc2,Hk2,Igfbp1,Pck2,Serpine1,Srebf1,Ucp1,Vegfa
MAP激酶信号传导	MAP激酶信号通路基因	Araf,Braf,Dok2,Dok3,Gab1,Grb2,Hras,Kras,Map2k1 ,Mapk1 ,Raf1,Rps6ka1,Rras,Rras2, Shc1.Sos1.
	MAP激酶信号传导靶基因	Bcl2l1 ,Ercc1,Fos,Klf10,Nos2,Ucp1
原始胰岛素信号靶基因		Cebpb,Fos,Jun,Lep,Prl
二级胰岛素信号传导效应器靶基因		Npy,Pck2,Tg
PPARγ靶		Acox1,Cap1,Cebpb,Cfd,Gpd1,Pck2,Pparg,Retn,Slc27a4
SREBP1目标		Acaca,Fbp1,G6pc,Gck,Pck2,Pklr.
葡萄糖代谢		Fbp1,G6pc,Gck,Gpd1,Hk2,Ins1,Lep,Pck2,Pklr.
糖原代谢		G6pc,Ppp1ca.Slc2a1,Sorbs1.
胆固醇代谢		Ldlr,Lep ,Srebf1.
脂肪酸代谢		Acox1,Slc27a4.
脂质转运		Ldlr,Slc27a4,Sorbs1.
其他脂质代谢基因		Araf,Prkcg,Prkci,Prkcz,Raf1,Shc1
蛋白质磷酸酶		Dusp14,Ppp1ca,Ptpn1,Ptprf.
蛋白激酶类		Akt1,Akt2,Akt3,Araf,Gsk3b,Igf1r,Map2k1,Mapk1,Pdpk1,Pik3ca,Pik3r1,Prkcg,Prkci,Prkcz, Raf1,Rps6ka1.
蛋白质生物合成		Eif2b1,Eif4ebp1,Ppp1ca
蛋白质运输		Gsk3b,Hras,Prkci,Rras2.
其他蛋白质代谢基因		Bcl2l1,Cebpa,Cebpb,Dok3,Frs2,Gab1,Gck,Grb10,Grb2,Jun,Ldlr,Lep,Nck1,Nos2,Pik3r2, Serpine1,Shc1,Sorbs1,Sos1,Ucp1
转录因子和调节因子		Aebp1,Cebpa,Cebpb,Fos,Jun,Klf10,Pparg,Srebf1
细胞周期		Gsk3b,Hras,Igf2,Jun,Kras,Mapk1,Vegfa.
细胞增殖		Gsk3b,Igf2,Irs2,Lep,Nos2,Shc1,Vegfa
生长因子和受体		Frs2,Igf1r,Igf2,Igfbp1,Lep,Shc1,Vegfa.
细胞分化		Cebpa,Cebpb,Gsk3b,Jun,Map2k1,Pik3r1,Pparg.

胰岛素信号通路图：

图片来源于：https://www.genome.jp/kegg-bin/show_pathway?map04910

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.